فحص في المختبر لتقييم تأثير الأجسام المضادة على المبيضات الاستوائية الحيوية

خذ صفيحة دقيقة تحتوي على فطر المبيضات الاستوائية.

تفرز الخلايا Sap2 ، وهو إنزيم محلل للبروتين البروتيني يشق بروتين سكري عبر الغشاء يسمى Msb2 ، مما يزيل مجاله المثبط.

هذا يحفز الفطريات على الالتصاق بالقاع وتنمو لتصبح مستعمرة صغيرة من الخميرة والأشكال الخيطية. تفرز الخلايا مكونات قابلة للذوبان وبوليمرات حيوية ، مما يؤدي إلى تكوين الأغشية الحيوية.

أضف عينة مصل تحتوي على أجسام مضادة خاصة ب Sap2 إلى آبار مختارة ، واحتضانها في الظلام.

ترتبط الأجسام المضادة ب Sap2 وتحييد نشاطها ، مما يعيق بقاء الخلية ونضوج الأغشية الحيوية.

في الآبار غير المعالجة ، ينضج الأغشية الحيوية إلى شبكة كثيفة من الخلايا والمصفوفة خارج الخلية.

قم بشفط السائل ، واغسل الأغشية الحيوية ، وجفف اللوحة بالهواء. أضف ركيزة لونية ، واحتضن في الظلام.

الخلايا القابلة للحياة ، باستخدام الأوكسيدوريدوتازات المرتبطة بالغشاء ، تقلل من الركيزة إلى منتج ملون.

انقل المادة الطافية الملونة واقرأ الامتصاص.

يشير

الامتصاص المنخفض في الآبار المعالجة بالمصل إلى تثبيط الأغشية الحيوية بوساطة الأجسام المضادة.

تحضير التخفيفات التسلسلية لعينات المصل المعطلة بالحرارة في وسط معقم RPMI1640 MOPS. أضف 100 ميكرولتر من تخفيف المصل المحدد إلى كل بئر من صفيحة الميكروتيتر المكونة من 96 بئر.

في العمود 10 ، أضف وسيط RPMI1640-MOPS فقط للتحكم الإيجابي للفطريات