طريقة قائمة على التألق المناعي لتصور خلايا الخصل في عمليات التصائم بالتبريد

0 views • 3:31 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ابدأ بطبق مزرعة يحتوي على أقسام الصائم الصائمية الثابتة بالفورمالين والمملوءة بالجيلاتين التي تتميز بخلايا الخصل مع الزغابات الدقيقة القمية والسوما على شكل بكرة

يغسل بمحلول احتواء يحتوي على منظف لاختراق أغشية الخلايا.

أضف محلول استرجاع المستضد القلوي. احتضن لكسر روابط البروتين المتشابكة التي يسببها التثبيت ، والكشف عن البروتينات للتلوين.

ضع محلول مانع لمنع ارتباط الأجسام المضادة غير المحدد.

تراكب مع الأجسام المضادة الأولية التي تستهدف بروتينا مرتبطا بالأكتين ، وتحديدا الفسفرة في خلايا الخصل.

إزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة. إدخال مزيج من الأجسام المضادة الثانوية المترافقة بالفلوروفور ، والصبغة المرتبطة بالحمض النووي ، وصبغة الفلورسنت الفالويد.

ترتبط الأجسام المضادة الثانوية بالأجسام المضادة الأولية ، وتلصقات صبغة الفلورسنت المتقارنة بالأكتين ، وعلامات الصبغة المرتبطة بالحمض النووي على نوى الخلية.

قم بإزالة المكونات غير المنضومة وأضف مخزن مؤقت خال من المنظفات.

انقل القسم إلى شريحة زجاجية مطلية بمادة لاصقة ، وقم بتثبيتها بالوسائط.

تحت المجهر متحد البؤر ، تشير الخلايا الخضراء على شكل بكرة مع مضان مكثف عند الطرف اللمعي وكتلة جذر حمراء ممتدة إلى وجود خلايا خصلة.

لتحضير أقسام الصائم ، ابدأ بضبط درجة حرارة غرفة ناظم التبريد ودرجة حرارة الجسم على 22 درجة مئوية تحت الصفر. ضع كتلة الأنسجة المجمدة في قالب بالتبريد في حجرة ناظم البرد لمدة 15 دقيقة على الأقل. بعد 15 دقيقة ، اقطع الكتلة إلى نصفين بشفرة حلاقة لفضح القسم العرضي من الصائم. قم بتركيب نصف الكتلة على محول ناظم البرد. قسم الصائم المملوء بالجيلاتين إلى أقسام بسمك 30 ميكرون. استخدم ملقطا مجمدا لنقل الأقسام برفق إلى طبق استزراع 35 ملم يحتوي على 3 ملليلتر من PBS.

بعد غسل الأقسام ثلاث مرات لمدة 5 دقائق مع 3 ملليلتر من PBS-T ، أضف 3 ملليلتر من محلول استرجاع المستضد المحضر حديثا إلى الطبق الذي يحتوي على الأقسام العائمة بحرية. ثم أغلق الغطاء ، وأغلق الفجوة بين الطبق والغطاء بشريط من شريط الفينيل ، واحتضن عند 50 درجة مئوية في حاضنة تهجين لمدة ثلاث ساعات دون اهتزاز.

بعد التلوين المناعي ، انقل طبق الأقسام الملطخة في PBS إلى مجهر مجسيم. ضع 200 ميكرولتر من PBS في قطرة في وسط شريحة زجاجية بيضاء مطلية ب AMS. بعد ذلك، استخدم طرف ماصة P200 لنقل قسم صائم واحد من الطبق إلى القطرة.

بعد ضبط محاذاة المقطع ، قم بشفط جميع البرامج المتبقية المحيطة بالقسم. أضف 20 ميكرولترا من وسائط التثبيت المائية ، وضع غطاء فوق الوسائط. أغلق حواف الغطاء على الفور بوسائط تثبيت قائمة على الزيلين ، واتركها تجف لمدة ساعتين إلى ثلاث ساعات قبل بدء الفحص المجهري متحد البؤر.

09:16

هيئة الثقافة والجامع جبل المناعي تلون ماوس وولف القنوات

Related Videos

0 Views

06:09

استخدام تلطيخ الفلورة المناعية للوجه لمراقبة الخلايا البطانية الوعائية مباشرة

Related Videos

0 Views

10:25

العزلوالتقييم الكمي لخلايا الفرشاة من القصبة الهوائية للفأر

Related Videos

0 Views

20:47

تقنية لتصور في الوقت نفسه للفيروسات محددة CD8 + الخلايا T والخلايا المصابة بالفيروسات في الموضع

Related Videos

0 Views

09:45

تصور من خلايا خلالية لشبكة (ICC) في الفئران كاجال

Related Videos

0 Views

06:15

طريقة توطين التألق المناعي في الجسم الحي لدراسة التوزيع الحيوي للأجسام المضادة

Related Videos

0 Views

05:01

التصوير المناعي المتعدد الإرسال لتحليل مجموعات الخلايا التائية المقاومة للعلاج المناعي

Related Videos

0 Views

07:05

الأسفار بوساطة التصوير المقطعي للكشف والتحديد الكمي لالتهاب الأمعاء مورين المتصلة بلعم

Related Videos

0 Views

09:51

وسم المناعية-فلوري Microtubules والبروتينات سينتروسومال في 3D في المختبر أورجانويدس الأمعاء والأنسجة المعوية السابقين فيفو

Related Videos

0 Views

06:26

استخدام الأجسام المضادة-والرمات-جيردين لتصور الخلايا خصل المعوية في الماوس التعويم الحر صائم كريوسيكشنز

Related Videos

0 Views

Last updated: 18 July 2026