موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 4:18 دقيقة • July 8th, 2025
خذ قسما لدماغ الفئران يتكون من التلفيف المسنن في الحصين ، وهو موقع لتكوين الخلايا العصبية يتكون من أسلاف عصبية في مراحل تمايز متميزة.
انقل القسم إلى محلول حجب النفاذية. تتخلل جزيئات المنظفات الموجودة في المحلول الخلايا ، بينما تمنع البروتينات مواقع الارتباط غير المحددة.
أضف كوكتيلا أساسيا للأجسام المضادة يستهدف علامات تكوين الخلايا العصبية المحددة ، وبروتين مرتبط بالأنابيب الدقيقة ، وبروتين خيوط وسيطة.
قم بإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة. إدخال أجسام مضادة ثانوية مختلفة تحمل علامة الفلوروفور مرتبطة بالأجسام المضادة الأولية.
أضف بروتينات المصل من نفس المضيف مثل أحد الأجسام المضادة الأساسية ، مما يؤدي إلى تشبع الباراتوبات على الأجسام المضادة الثانوية.
أدخل شظايا Fab أحادية التكافؤ التي تشبع حواتم بروتينات المصل ، مما يمنع الارتباط غير المحدد.
أضف جسما مضادا أساسيا ثانيا مرفوعا من نفس المضيف ، يرتبط ببروتين خيوط وسيط آخر.
إدخال الأجسام المضادة الثانوية المسماة بالفلوروفور التي تستهدف الجسم المضاد الأولي الثاني.
باستخدام الفحص المجهري الفلوري ، حدد الأنواع الفرعية للسلف العصبي التي تعبر عن مجموعات علامات فريدة.
ابدأ بنقل الأقسام من محلول التجمد إلى TBS بمساعدة فرشاة دقيقة. اشطف الأقسام جيدا ، بدءا من الغسيل طوال الليل عند 4 درجات مئوية ، متبوعا بخمس غسلات لمدة 10 دقائق في درجة حرارة
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية