$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
ابدأ بغسل قسم ثابت من القلب في محلول كاكوديلات الصوديوم الذي يعمل على استقرار بنية الأنسجة. اغمر القسم في رابع أكسيد الأوزميوم لتلطيخ دهون الغشاء.
عالج بخلات الصوديوم للحفاظ على درجة الحموضة المثلى للتلطيخ.
أضف أسيتات اليورانيل إلى تلطيخ الجزيئات الحيوية ، مما يوفر تباينا أفضل أثناء الفحص المجهري.
تجفيف الأنسجة بتركيزات متزايدة من الإيثانول متبوعا بالأسيتون.
قم بتضمين الأنسجة في الراتنج ، واحصل على أقسام رفيعة للغاية ، وانقلها إلى شبكة مجهرية.
أدخل ميتا دوريدات الصوديوم لإزالة رابع أكسيد الأوزميوم ، وكشف البروتين الخلوي.
يقوم المركب أيضا بأكسدة البروتين السكري ، مما يخلق مجموعات ألدهيد تفاعلية ، والتي يتم تحييدها عن طريق معالجة الجلايسين.
أدخل حاجزا حازما ، يمنع ارتباط الأجسام المضادة غير المحددة.
أضف الأجسام المضادة الأولية الخاصة بالبروتين المستهدف متبوعة بالأجسام المضادة الثانوية البيوتينية.
أضف النقاط الكمومية المترافقة بالستربتافيدين التي ترتبط بالبيوتين.
تحت المجهر الإلكتروني ، تظهر المناطق المسماة بالنقاط الكمومية تباينا أعلى ، مما يساعد على توطين دقيق للبروتين المستهدف تحت الخلوية.
بعد 24 ساعة من التثبيت ، اغسل الأنسجة في محلول كاكوديلات الصوديوم 0.1 مولار مرتين لمدة 20 دقيقة. قم بإزالة الأنسجة من محلول كاكوديلات الصوديوم واغمرها في محلول رابع أكسيد الأوزميوم بنسبة 2٪ لمدة 4 ساعات في درجة حرارة الغرفة.
بعد التذبذب ، اغمر الأنسجة في محلول أسيتات الصوديوم 2٪ لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك ، اغمر الأنسجة في محلول أسيتات اليورانيل 2٪ لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة. بعد تلطيخ أسيتات اليورانيل ، قم بتجفيف الأنسجة بالتتابع من خلال الكحوليات المتدرجة والأسيتون.
قم بتضمين الأنسجة المجففة في راتنجات الايبوكسي منخفضة اللزوجة كما هو موضح في المخطوطة. ضع الأنسجة في راتينج جديد في قوالب دقيقة مقاس 8 ملم ، وقوالب ، وعلاج الأنسجة المضمنة عند 70 درجة مئوية طوال الليل. بعد العثور على منطقة الاهتمام باستخدام سكين 45 درجة ، قم بإنتاج أقسام رفيعة للغاية من الذهب الباهت. ضع هذه الأقسام الرقيقة للغاية على الجانب الباهت من شبكة نحاسية مكونة من 200 شبكة.
ابدأ التلوين عن طريق كشف المستضد عن طريق وضع 20 ميكرولترا من محلول النقش ميتابريدات الصوديوم على طبقة بارافين نظيفة. ضع الشبكة المجففة مع أقسام الأنسجة على قطرة محلول الحفر. اترك شبكة القسم على المحلول لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. اغسل أقسام المناديل المحفورة عن طريق وضعها على قطرة من الماء المقطر لمدة 60 ثانية.
قم بسد الألدهيدات المتبقية عن طريق وضع شبكة المقطع على قطرة من محلول جلايسين 0.05 مولار لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. امسح حواف الشبكة على ورق الترشيح لإزالة محلول الجلايسين المتبقي. ضع شبكة القسم في 10 إلى 20 ميكرولترا من محلول الحجب لمدة 25 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
امسح حواف الشبكة على ورق الترشيح ، وضع أقسام الشبكة على مخفف الجسم المضاد للتكييف في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق. احتضان أقسام الشبكة بالجسم المضاد الأساسي لمدة 1 ساعة و 30 دقيقة في غرفة رطبة. جفف الشبكة بواشط الأجزاء الشبكية بمخفف الأجسام المضادة مرتين لمدة 5 دقائق لكل منهما.
احتضان أقسام الشبكة بجسم مضاد ثانوي بيوتينيل لمدة 1 ساعة في غرفة رطبة. بمجرد تجفيف الشبكة باللطخة ، اغسل أقسام الشبكة بمخفف الجسم المضاد مرتين لمدة 5 دقائق لكل منهما. احتضان أقسام الشبكة في QD المترافق بالستربتافيدين المتاح تجاريا لمدة 1 ساعة في غرفة مرطبة في درجة حرارة الغرفة. منع التعرض للضوء عن طريق تغطية الغرفة بورق الألمنيوم. بعد تجفيف حواف الشبكة باستخدام ورق الترشيح ، اغسل أقسام الشبكة عن طريق وضعها على قطرات الماء لمدة دقيقتين ، وامسح حواف الشبكة حتى تجف.