تقنية وضع العلامات المناعية لتصور التوطين الخلوي للبروتينات

ابدأ بغسل قسم ثابت من القلب في محلول كاكوديلات الصوديوم الذي يعمل على استقرار بنية الأنسجة. اغمر القسم في رابع أكسيد الأوزميوم لتلطيخ دهون الغشاء.

عالج بخلات الصوديوم للحفاظ على درجة الحموضة المثلى للتلطيخ.

أضف أسيتات اليورانيل إلى تلطيخ الجزيئات الحيوية ، مما يوفر تباينا أفضل أثناء الفحص المجهري.

تجفيف الأنسجة بتركيزات متزايدة من الإيثانول متبوعا بالأسيتون.

قم بتضمين الأنسجة في الراتنج ، واحصل على أقسام رفيعة للغاية ، وانقلها إلى شبكة مجهرية.

أدخل ميتا دوريدات الصوديوم لإزالة رابع أكسيد الأوزميوم ، وكشف البروتين الخلوي.

يقوم المركب أيضا بأكسدة البروتين السكري ، مما يخلق مجموعات ألدهيد تفاعلية ، والتي يتم تحييدها عن طريق معالجة الجلايسين.

أدخل حاجزا حازما ، يمنع ارتباط الأجسام المضادة غير المحددة.

أضف الأجسام المضادة الأولية الخاصة بالبروتين المستهدف متبوعة بالأجسام المضادة الثانوية البيوتينية.

أضف النقاط الكمومية المترافقة بالستربتافيدين التي ترتبط بالبيوتين.

تحت المجهر الإلكتروني ، تظهر المناطق المسماة بالنقاط الكمومية تباينا أعلى ، مما يساعد على توطين دقيق للبروتين المستهدف تحت الخلوية.

بعد 24 ساعة من التثبيت ، اغسل الأنسجة في محلول كاكوديلات الصوديوم 0.1 مولار مرتين لمدة 20 دقيقة. قم بإزالة الأنسجة من محلول كاكوديلات الصوديوم واغمرها في محلول رابع أكسيد الأوزميوم بنسبة 2٪ لمدة