موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 3:43 دقيقة • July 8th, 2025
خذ كلية فأر ثابتة. تسبب الدهون في الأنسجة تشتت الضوء ، وتسبب الأصباغ امتصاص الضوء ، مما يجعل الخلايا معتمة.
عالج الأنسجة باستخدام CUBIC-L لإزالة الدهون وإزالة اللون. يزيل الكحول الأميني الموجود في CUBIC-L الدهون والأصباغ ، مما يقلل من تشتت الضوء ويزيد من الشفافية.
تتخلل جزيئات المنظفات في CUBIC-L الخلايا أيضا.
إدخال كوكتيل الأجسام المضادة الأولية التي ترتبط بهيدروكسيلاز التيروزين السيتوبلازمي في الخلايا العصبية للأعصاب السمبثاوية وأكتين العضلات الملساء ألفا في خلايا العضلات الملساء للأوعية.
أضف الأجسام المضادة الثانوية المسماة بالفلوروفور والتي ترتبط بالأجسام المضادة الأولية.
قم بإجراء تثبيت الأنسجة للحفاظ على علاج الأجسام المضادة.
اغمر الأنسجة في CUBIC-R + الذي يحل محل الماء ويطابق معامل الانكسار للبروتينات ، مما يقلل من تشتت الضوء ويزيد من الشفافية.
تحت المجهر الفلوري الخفيف ، تضيء الألواح الضوئية الأنسجة ، مما يثير الفلوروفورات.
التقط الضوء المنبعث من الفلوروفور وأعد بناء صورة ثلاثية الأبعاد، مع عرض توزيع الأعصاب الودي حول الشرايين في الكلى.
للبدء ، قم بإجراء تثبيت الغمر مباشرة بعد تثبيت التروية وأخذ عينات الكلى عن طريق غمر الكلى في 4٪ بارافورمالدهيد عند 4 درجات مئوية لمدة 16 ساعة. أعط ثلاث غسلات باستخدام PBS لمدة ساعتين لكل منها. قم بإجراء عملية إزالة اللون وإزالة الدهون عن طري
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية