الكشف القائم على مصفوفة الببتيد للأجسام المضادة ل HLA المضادة للمتبرعين في متلقي الأعضاء

خذ مصفوفة ببتيد مشتقة من مستضد الكريات البيض البشري للمتبرع بالأعضاء أو تسلسل HLA الذي يشتمل على ببتيدات مختلفة على غشاء السليلوز.

يحمل كل ببتيد عدم تطابق واحد على الأقل من الأحماض الأمينية بين تسلسل HLA للمتبرع والمتلقي ، مما يمثل حاتمة محتملة لرفض الأعضاء بوساطة الأجسام المضادة.

عالج باستخدام عازل مانع لمنع تفاعل الأجسام المضادة غير المحدد.

أضف مصل المتلقي الذي تم جمعه بعد زرع الأعضاء ، والذي يحتوي على الأجسام المضادة.

ترتبط هذه الأجسام المضادة ، التي تشكلت ضد HLA للمتبرع ، بحتمة مستهدفة.

أضف جسما مضادا ثانويا مترافقا بالبيروكسيداز يرتبط بالجسم المضاد.

أضف الركيزة الكيميائية وبيروكسيد الهيدروجين. يستخدم البيروكسيديز بيروكسيداز بيروكسيد الهيدروجين لأكسدة الركيزة ، مما ينبعث منها الضوء.

امسح الغشاء للحصول على صورة.

أضف عازلة لتجريد الأجسام المضادة المقلدة. قم بإعادة البحث مع مصل متلقي ما قبل الزرع والحصول على صورة.

بالمقارنة مع صورة ما قبل الزرع ، تشير البقع الداكنة في صورة ما بعد الزرع إلى حواتم HLA الخاصة بالمتبرع والتي تحرض على تفاعل الأجسام المضادة.

عندما يتم تصنيع المصفوفات ، قم بسد الأغشية ب 20 مل من الحليب الخالي من الدسم بنسبة 5٪ المذاب في محلول ملحي مخزن في Tris مع 0.1٪ Tween 20 أو TBST لفترة الحضانة المناسبة مع الهزاز. بعد ذلك ، اغسل الغشاء ثلاث مرات ب 20 مل من TBST الطاز