موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 5:21 دقيقة • July 8th, 2025
خذ شريحة مصفوفة دقيقة تحتوي على ببتيدات هيستون مع تعديلات ما بعد الترجمة المستهدفة وغير المستهدفة أو PTMs.
يتم تثبيت الببتيدات عن طريق البيوتين المترافق في أماكن محددة على الشريحة الزجاجية الوظيفية بالستربتافيدين.
تحتويالبقع أيضا على فلوروفور أخضر متعادل بالبيوتين ، مما يسهل تحديد البقع.
أدخل عازلة مانعة ، مما يمنع تفاعل الأجسام المضادة غير المحددة.
قم بإزالة المخزن المؤقت وجهاز الطرد المركزي لتجفيف الشريحة.
داخل طابعة الشمع ، قم بحدود المصفوفة بالشمع.
موازنة المصفوفة مع مخزن مؤقت تهجين.
احتضان الأجسام المضادة الأولية الخاصة ب PTM المستهدف.
إدخال الأجسام المضادة الثانوية المترافقة بالفلوروفور الأحمر التي ترتبط بالأجسام المضادة الأولية.
قم بإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة وأجهزة الطرد المركزي لتجفيف الشريحة.
صور الشريحة باستخدام ماسح ضوئي للمصفوفات الدقيقة. يساعد التألق الأخضر في تحديد البقع ، بينما يشير التألق الأحمر إلى تفاعل الأجسام المضادة PTM ، مما يدل على خصوصية الأجسام المضادة.
يوضح التعرف على PTM المستهدف خصوصية الجسم المضاد ، بينما يشير التعرف على PTMs غير المستهدفة إلى تفاعل الأجسام المضادة المتبادلة.
مسترشدا بخريطة لوحة المصدر ، قم بتحميل 1 إلى 2 ميكرولتر من كل ميزة ببتيد في الآبار المخصصة لواحد أو أكثر من الألواح الصغيرة الحجم 384 بئرا. قم بتخفيف كل ميزة عشرة أضعاف ب
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية