موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 4:57 دقيقة • July 8th, 2025
ضع طبقا مزروقا مع أجنة سمك الزرد المكسوة المضمنة في الاغاروز على مرحلة المجهر.
خذ محلول صبغة يحتوي على تركيز منخفض من متقارنات الأجسام المضادة ، ويحمل جسما مضادا يحمل علامة فلورسنت حمراء وجسم مضاد مضاد ل DeltaD.
حقن محلول الصبغة في البطين الخلفي للجنين ، واستهداف أسلاف الخلايا الدبقية الشعاعية المنقسمة بنشاط أو RGPs.
حرر الجنين المدمج واستعادته في وسط غني بالمغذيات.
أثناء التعافي ، تتفاعل المترافقات الفلورية مع عدد قليل من جزيئات Notch ligand DeltaD على RGP ، مما يؤدي إلى بدء الاستيعاب وتكوين الجسيم الداخلي.
يسمح التركيز المترافق المنخفض لروابط DeltaD غير المنضمة بالتفاعل مع مستقبل Notch ، مما يؤدي إلى تنشيط مسار إشارات Notch في RGPs.
بعد الشفاء ، انقل جنينا مخدرا مع الاغاروز إلى طبق زجاجي مع جانبه الظهري لأسفل للتصوير.
قم بإجراء التصوير الفلوري بفاصل زمني لالتقاط انقسام الخلية ، والذي يظهر قسما غير متماثل للجسيمات الداخلية الفلورية المحتوية على DeltaD إلى خليتين ابنتيتين ، مما يؤكد تنشيط إشارات Notch / DeltaD.
ضع الأجنة المضمنة تحت المجهر المجسم وقم بتغطية الاغاروز بماء البيض. اضبط حاقن ضغط الهواء باستخدام أجهزة المعالجة الدقيقة ، ووضعها بالقرب من المجاهر. استخدم أسطوانة الغاز الفولاذية التي تحتوي على النيتروجين الغازي تحت ضغط عال كمورد للهواء.
بمجرد تركيب الأجنة في الاغاروز ، افت
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية