اختبار مناعي متعدد الإرسال قائم على الخرزة لتحديد أهداف السيتوكين المتعددة

خذ صفيحة متعددة الآبار مع مرشحات في القاعدة.

أضف عينة اختبار تحتوي على سيتوكينات مختلفة.

أضف مجموعات مختلفة من الكريات المجهرية متباينة حسب الحجم وشدة التألق الداخلي.

يتم اقتران كل مجموعة مع جسم مضاد يستهدف سيتوكين معين.

احتضان اللوحة في الظلام تحت التحريض.

ترتبط الأجسام المضادة بالسيتوكينات المستهدفة ، مما يؤدي إلى جملتها على الكريات المجهرية.

ضع مكنسة كهربائية لإزالة السيتوكينات غير المرتبطة. يتم الاحتفاظ بالسيتوكينات المرتبطة بالكرة المجهرية بسبب حجم المسام الأصغر للغشاء.

أضف مزيجا من الأجسام المضادة للكشف المترافق مع البيوتين التي ترتبط بالسيتوكينات المرتبطة بالكرة المجهرية.

أضف ستربتافيدين مترافق بالفلورسنت واحتضانه في الظلام تحت التحريض. يرتبط الستربتافيدين بالبيوتين ، مما يؤدي إلى شل حركة المراسل على مركب الكرة المجهرية.

قم بإزالة الجزيئات غير المرتبطة وإعادة تعليق المجهرية.

باستخدام قياس التدفق الخلوي ، حدد السيتوكينات المرتبطة عن طريق تحديد الحجم والتألق الداخلي للكريات المجهرية.

لتحديد كمية السيتوكين المعين ، قم بقياس شدة مضان المراسل.

لإجراء الفحص ، اترك جميع الكواشف تسخن إلى درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام.

تستخدم ألواح ترشيح البولي بروبلين في هذا العرض التوضيحي. من الضروري للغاية أن تظل اللوحة منتصبة أثناء إجراء الفحص بأكمله ، بما في ذلك خطوات الغسيل ، لتجنب فقدان الخر