موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 3:39 دقيقة • July 8th, 2025
خذ صفيحة متعددة الآبار تحتوي على خلايا ثدييات مغلفة في نظام هيدروجيل يحاكي بيئة المصفوفة الطبيعية خارج الخلية.
قم بإزالة وسط الثقافة. عالج باستخدام مخزن مؤقت للتثبيت لربط البروتينات ، مع الحفاظ على سلامة الخلية.
أضف محلولا يحتوي على منظف لاختراق الغشاء الخلوي.
أدخل محلول مانع لمنع ارتباط الأجسام المضادة غير المحددة في الخطوات اللاحقة.
أضف كوكتيل الأجسام المضادة الأولية التي تدخل الخلايا وترتبط على وجه التحديد بالخيوط الوسيطة السيتوبلازمية وعامل النسخ المستهدف.
قم بإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة. أدخل الأجسام المضادة الثانوية المصنفة بالفلورسنت وصمة عار نووية لتسمية الحمض النووي بالفلورسنت.
قم بإزالة الجزيئات غير المرتبطة.
قم بتركيب ثقافة الهيدروجيل على شريحة باستخدام وسيط تثبيت.
استخدم مجهر متحد البؤر لمراقبة الخلايا الملطخة بالمناعة.
أولا ، استنشق الوسط من كل بئر. ثم اغسل الآبار ب 1 ملليلتر من DPBS الدافئ. بعد اكتمال الغسيل ، أضف 750 ميكرولتر من محلول التثبيت إلى كل بئر. ثم احتضن الطبق المكون من 24 بئرا عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. بعد الحضانة ، استنشق محلول التثبيت من كل بئر ، وتخلص من المثبت في حاوية نفايات خطرة. بعد ذلك ، أضف 1 مليلتر من DPBS إلى العينة وتخلص من DPBS على الفور في حاوية نفايات خطرة.
بعد ذلك ، أضف 750 ميكرولتر من محلول النفاذية لنفاذية العينة لمدة ساعة وا
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية