تقييم التوزيع داخل الخلايا لمترافقات الأجسام المضادة المعدلة بالببتيد المشتقة من الفيروس
موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 4:59 دقيقة • July 8th, 2025
ابدأ بخلايا الأرومة الحمراء البشرية الملتصقة.
إدخال اقترانات الأجسام المضادة المشتقة من الفيروسات والمعدلة بالببتيد. تحتوي هذه المترافقات على تسلسل توطين نووي ، أو NLS ، من الفيروس ، وبقايا حمض الكوليك.
أثناء الحضانة ، تتفاعل مترافقات الأجسام المضادة مع مستقبلات سطح الخلية وتستوعب داخل الجسيمات الداخلية.
يساعد حمض الكوليك الموجود في المترافق على الهروب من الحجرة الداخلية ، مما يتيح التراكم داخل الخلايا ، بينما تسهل بروتينات النقل و NLS توطينها النووي.
أدخل المخزن المؤقت المحتوي على التربسين و EDTA لفصل الخلايا وإزالة المترافقات المرتبطة بالسطح.
أضف وسائط غنية بالمصل لتثبيط نشاط التربسين.
أجهزة الطرد المركزي لجمع الخلايا ؛ إصلاحها ونفاذها.
إدخال الأجسام المضادة الثانوية ذات اللون الأحمر البعيد المسمى بالفلوروفور ، وترتبط بالمترافقات الموضعية والغسل.
عالج بصبغة تلطيخ نووية.
راقب تحت المجهر متحد البؤر والتقط صورا على أعماق مستوية مختلفة.
بعد معالجة الصور ، تظهر الخلية بؤر فلورية خضراء صغيرة داخل السيتوبلازم والنواة ، مما يؤكد التوزيع داخل الخلايا لاقترانات الأجسام المضادة.
عالج خلايا TF-1a المستهدفة ب 200 نانومولار 7G3-حمض الكوليك المضاد المترافق. قم بتضمين الخلايا المعالجة بالأجسام المضادة أحادية النسيلة المعدلة. احتضان 5 × 106 خلايا موجبة للمستضد مع المترافقات عند 37 درجة مئوية لمدة
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية