التسريب الخاضع للرقابة للأجسام المضادة الخاصة بالببتيد Aβ وقلة Aβ في الحصين الفئران

خذ فأرا مستيقظا مع قنيتين مرشدتين مزروعة ثنائيا في الحصين.

ترتبط القنيات بمضخات تناضحية مزروعة تحت الجلد تحتوي على أجسام مضادة خاصة بالأميلويد بيتا أو Aβ والتحكم ، على التوالي.

يؤدي

تركيز الجسم المضاد العالي داخل المضخة إلى انتشار الماء من الأنسجة المحيطة من خلال غشاءه الخارجي شبه المنفذ ، مما يؤدي إلى توسيع الطبقة التناضحية.

يضغط هذا التمدد على خزان الجسم المضاد ، مما يسهل إطلاق الأجسام المضادة المتحكم فيها.

قم بتوصيل قنسيتين داخليتين بقسطرة مملوءة بالماء المعقم متصلة بمضخة تسريب.

املأ القنيات بالماء.

بعد ذلك ، استنشق كمية صغيرة من الهواء ، مما يؤدي إلى تكوين فقاعة.

الآن ، املأ القنيات بقليل قليل Aβ السامة للأعصاب ، وهي مجاميع قابلة للذوبان من ببتيدات Aβ.

أدخل القنيات الداخلية في قنيات التوجيه. ابدأ تشغيل المضخة لتوصيل القلة بالتحكم فيه ، باستخدام فقاعة الهواء لمنع التدفق العكسي وتتبع معدل التسريب.

يجب تطبيق حقن القلة المتكررة للمدة المطلوبة.

النموذج جاهز لدراسة تفاعلات الأجسام المضادة بين أوليغومر Aβ.

قبل يوم واحد من التثبيت ، املأ المضخات التناضحية بالجسم المضاد 6E10 أو الجسم المضاد IgG1 للتحكم وفقا لتعليمات الشركة المصنعة. ضع المضخات في ماء مقطر معقم واحتفظ بها عند 37 درجة مئوية طوال الليل لتنشيط المضخات.

بمجرد تخدير الفئران بنسبة 3٪ من الأيزوفلوران وحلقها بين لوحي الكتف ، قم بتطهير الجلد بمحلول 2٪ غلوكونات الكلورهيكسيدين و 2٪ كحول الأيزوبروبيل. بعد عمل شق بطول 2 سم بمشرط بين لوحي الكتف ، حدد موقع قسطرة PE-50 المتصلة بقنية التوجيه.

بعد ذلك ، قم بقص نهايات قسطرة PE-50 التي تحتوي على أسمنت الأسنان بمشرط. قم بتوصيل المضخات التناضحية بقسطرة PE-50 وأضف بعض الأسمنت السني عند المضخة وتقاطع القسطرة لتأمين الاتصال. أخيرا ، قم بغرز الجلد بإحكام باستخدام 4/0 خيوط. ضع مرة أخرى في قفصه على وسادة حرارية دافئة ، وراقبه أثناء استيقاظه من تخدير الأيزوفلوران.

بعد تحضير محلول أوليغومر أميلويد بيتا كما تم الإبلاغ عنه سابقا ، اسمح للمحلول بالتجمع ديناميكيا وتلقائيا لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة قبل التسريب. ثم املأ كل حقنة ب 5 ميكرولترات من الماء المقطر المعقم.

بعد ذلك ، قم بقطع قسطرتين من PE-50 إلى حوالي 60 سم بطول مشرط. استخدم حقنتين سعة 1 مليلتر مزودة بإبر قياس 21 لملء كلتا القسطرة بالماء المقطر المعقم. بينما تظل المحاقن سعة 1 مليلتر في مكانها ، في أحد طرفي كل قسطرة ، قم بتوصيل الأطراف الحرة بمحاقن هاميلتون. قم بإزالة المحاقن سعة 1 مليلتر وتأكد من عدم وجود فقاعات هواء في القسطرة.

أدخل القنية الداخلية في نهاية قسطرة PE-50. استخدم محاقن هاميلتون لملء كل قنية داخلية حتى 1 ميكرولتر ، ثم اصنع فقاعة هواء عن طريق سحب المكبس للخلف إلى علامة 2 ميكرولتر.

الآن امزج محلول أوليغومر أميلويد بيتا عن طريق سحب العينات لأعلى ولأسفل باستخدام طرف من الحد الأدنى من الالتصاق. تجنب تكوين الفقاعات أثناء الخلط. بعد ذلك ، املأ كلا القنيات الداخلية ب 1.5 ميكرولتر من محلول أوليغومر الأميلويد بيتا عن طريق سحب المكابس مرة أخرى إلى 3.5 ميكرولتر.

بعد ذلك ، ضع علامة على الخطوط قبل وبعد فقاعة الهواء في كلتا القسطرة. هذا بمثابة نقطة تفتيش للتسريب المستمر. ضع الجرذ المستيقظ في قبضة احتضان وشل حركة رأسه. قم بإزالة القنية الوهمية من القنية ذات التوجيه ، ثم أدخل القنية الداخلية المعدة مسبقا في قنية التوجيه. تحقق من إدخالها بالكامل وتثبيتها جيدا على قاعدة قنية التوجيه. الآن ، حرر الجرذ من قبضة التحاضن ، وأعده إلى قفصه للحد من إجهاد المناولة.

قم بتشغيل مضخة التسريب وحقن 1 ميكرولتر من محلول أوليغومر الأميلويد بيتا بمعدل 0.1 ميكرولتر في الدقيقة. أثناء التسريب ، تأكد من أن مكبس المحقنة يتحرك من 3.5 ميكرولتر إلى 2.5 ميكرولتر ، وأن فقاعات الهواء في كل من القسطرة PE-50 تتحرك باستمرار. افحص الجرذ للتأكد من أن القسطرة لا تلتف معا.

اترك القنية الداخلية في مكانها لمدة 5 دقائق أخرى بعد التسريب للسماح بالانتشار الفعال لمحلول أوليغومر أميلويد بيتا. بعد التسريب ، أعد الجرذ إلى قبضة التحاضن ، وقم بإزالة القنية الداخلية والقنية ذات التوجيه المغطى لمنع ارتجاع المحلول المحقون. ضع القنية الوهمية التي توقفت قبل ذراع زاوية قنية التوجيه. أخيرا ، أعد إلى قفصه.