تقنية في المختبر لدراسة الاتجار بمستقبلات الغلوتامات في الخلايا العصبية في الحصين

خذ ثلاث عينات من الثقافات العصبية في الحصين على أغطية.

أدخل الأجسام المضادة الأولية لتسمية مستقبلات الغلوتامات المعبر عنها على السطح.

أضف وسيطا مشروطا إلى العينتين الثانية والثالثة للحث على الالتقام الخلوي للمستقبلات المرتبطة بالأجسام المضادة.

في العينة الثالثة ، أضف شظايا فاب لمنع الحلقات على الأجسام المضادة غير الخلوية.

أدخل مثبطا لمنع الالتقام الخلوي للمستقبلات مع السماح بإعادة تدوير المستقبلات إلى السطح.

في جميع العينات ، قم بإصلاح الخلايا وإضافة محلول حجب لمنع وضع العلامات غير المحددة.

إدخال الأجسام المضادة الثانوية الموسومة بالفلوروفور لتسمية الأجسام المضادة الأولية على المستقبلات المرتبطة بالسطح ، بما في ذلك الأجسام المعاد تدويرها.

نفاذية الأغشية الخلوية.

أضف الجسم المضاد الأساسي مرة أخرى إلى العينة الأولى لتسمية مستقبلات التقام الخلوي الموجودة مسبقا.

إدخال جسم مضاد ثانوي مختلف يحمل علامة الفلوروفور لجميع العينات لتسمية الأجسام المضادة الأولية المرتبطة بمستقبلات الخلايا الداخلية ، والتمييز بين المستقبلات الخلوية والمستقبلات المرتبطة بالسطح.

باستخدام المجهر متحد البؤر ، حدد كمية المستقبلات المعبر عنها على السطح ، والتقام الخلوي ، والمعاد تدويرها في العلاجات المختلفة.

لبدء هذا الإجراء ، انقل الغطاء جانب الخلية إلى صينية مغطاة بغشاء البارافين لحفظ الكواشف وتسهيل التلاعب. حفظ وص