فحص في الجسم الحي للكشف عن الانقسام في الديدان الخيطية المعدلة وراثيا

خذ الديدان الخيطية المعدلة وراثيا ، مع خلايا عضلية في جدار الجسم تعبر عن DCT-1 الموسوم بالفلوروفور الأخضر ، وبروتين غشاء الميتوكوندريا الخارجي ، وبروتين غشاء البلعمة الأحمر الموسوم بالفلوروفور ، وهو بروتين غشاء البلعمة.

ضع الديدان فوق وسط نمو يحتوي على دواء محفز للانقسام.

يضر الدواء الميتوكوندريا الخلوية ، مما يؤدي إلى الانقسام أو الإزالة الانتقائية للميتوكوندريا التالفة.

يخضع DCT-1 على الميتوكوندريا التالفة للانتشار في كل مكان والفسفرة ، مما يسهل التفاعل مع LGG-1 على غشاء البلعمة.

يتمدد البلعمة حول الميتوكوندريا لتشكيل البلعمة الذاتية المستهدفة للتدهور اللايزوزومي.

ضع الديدان الخيطية في مخدر على شريحة مجهرية لشل حركتها ، ووضع غطاء.

تحت المجهر الفلوري ، تصور البقع الصفراء داخل خلايا العضلات ، مما يشير إلى التوطين المشترك ل DCT-1 الذي ينبعث منه مضان أخضر و LGG-1 يعرض مضان أحمر. هذا يؤكد حدوث انقسام الفرج.

في اليوم الأول ، اختر يرقات L4 للحيوانات المعدلة وراثيا التي تعبر عن كل من DCT-1 :: GFP و DsRed :: LGG-1 في خلايا عضلات جدار الجسم وضعها على صفيحة وسائط نمو الديدان الخيطية المصنفة OP50. ضع من 5 إلى 10 ديدان على كل صفيحة طولها 3.5 سم باستخدام ثلاث أطباق على الأقل. عند الانتهاء ، احتضن الديدان الخيطية عند 20 درجة مئوية.

بعد ذلك ، في اليوم 5 ، قم بمزامنة الديدان الخيطية عن طريق اختيا