مقايسة مناعية للرحلان الكهربائي الشعري للكشف عن المؤشرات الحيوية للبروتين

للكشف عن المؤشر الحيوي للبروتين المرتبط بالمرض، خذ لوحة المقايسة المناعية.

تحتوي

اللوحة على مصفوفات فصل وتكديس مملوءة مسبقا مطلوبة لفصل البروتين على أساس الحجم.

قم بتحميل البروتينات وكواشف المقايسة المناعية في آبار صفائح مميزة.

بدء التشغيل داخل محلل CEI. تقوم الخرطوشة الشعرية في المحلل بشفق المصفوفات لتشكيل هلام داخل كل شعيرات دموية.

ثم تقوم الشعيرات الدموية بشفط البروتينات. أثناء الرحلان الكهربائي ، تهاجر البروتينات وتنفصل بناء على أوزانها الجزيئية.

يقدم

المحلل ضوء الأشعة فوق البنفسجية ، مما يؤدي إلى شل حركة البروتينات في الشعيرات الدموية.

يزيل مخزن الغسيل المؤقت المصفوفات والبروتينات غير المرتبطة. ثم يتدفق المخزن المؤقت للحظر ، مما يحظر مواقع التفاعل غير المحددة.

يقدم

المحلل أجساما مضادة أولية ترتبط بالعلامة الحيوية ، تليها الأجسام المضادة الثانوية المترافقة مع البيروكسيديز التي تتفاعل مع الأجسام المضادة الأولية.

اغسل ثم أضف الركيزة الكيميائية. يؤكسد بيروكسيداز الركيزة ، وينبعث منه لمعان.

قم بقياس شدة اللمعان ومقارنتها بمعيار البروتين للكشف عن المؤشرات الحيوية.

بعد جمع 100 ميكرولتر من محللات الصفائح الدموية البشرية من مرضى التصلب الجانبي الضموري والأشخاص الأصحاء ، املأ القوالب التي تم إنشاؤها داخليا للتخطيط الشعري وإعداد العينة. جدول تحضير خليط العينة ديناميكي وسيحسب تلقائيا مقدار الحجم الذي يجب إزالته من المصدر. ضع جميع كواشف الفحص على الثلج ، باستثناء العبوة القياسية التي يجب أن تبقى في درجة حرارة الغرفة.

لتحضير مزيج الفلورسنت الرئيسي ، أضف 40 ميكرولترا من الماء منزوع الأيونات إلى أنبوب شفاف من DTT ، وأضف 20 ميكرولترا من المخزن المؤقت للعينة 10X ، و 20 ميكرولترا من محلول DTT المحضر 400 مليمول إلى الأنبوب الوردي من مجموعة الفحص.

لتحضير السلم الحيوي ، أضف 16 ميكرولترا من الماء منزوع الأيونات ، و 2 ميكرولتر من المخزن المؤقت للعينة 10X ، و 2 ميكرولتر من محلول DTT المحضر 400 ملليمولار إلى الأنبوب الأبيض الموجود في المجموعة. بعد الخلط اللطيف ، انقل محلول السلم إلى أنبوب PCR سعة 200 ميكرولتر قبل تغيير الطبيعة.

أضف 1.5 ميكرولتر من عازلة العينة 10X و 148.5 ميكرولتر من الماء منزوع الأيونات إلى أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 600 ميكرولتر. والدوامة للخلط ، قبل وضع الأنبوب على الجليد. أضف الأجسام المضادة ذات الأهمية مباشرة إلى المخفف ، كما هو موضح في الجدول ، واغسل طرف الماصة عدة مرات للحصول على محلول أجسام مضادة متجانسة.

لتحضير مزيج العينة الشعرية ، افتح جميع أنابيب PCR ، وأضف 1.6 ميكرولتر من المخزن المؤقت للعينة الفلورية 5X إلى كل أنبوب ، كما هو موضح في الجدول ، باستخدام تقنية سحب العينات العكسية ، وأغلق كل أنبوب على الفور عند إضافة المخزن المؤقت. عند إضافة كل المخزن المؤقت ، افتح جميع الأنابيب ، وأضف مخزن مؤقت عينة 0.1x بوحدات التخزين كما هو موضح في الجدول ، وأغلق كل أنبوب على الفور عند إضافة المخزن المؤقت.

بعد ذلك ، افتح جميع الأنابيب ، وأضف عينات البروتين كما هو موضح في الجدول ، وأغلق كل غطاء أنبوب على الفور. عند إضافة جميع العينات ، قم بعمل طرد مركزي لجميع الأنابيب لفترة وجيزة في جهاز طرد مركزي على الطاولة. دوامة لخلط العينات ، والطرد المركزي مرة أخرى.

في نهاية الطرد المركزي الثاني ، ضع جميع الأنابيب في جهاز تدوير حراري بغطاء ساخن ، وقم بتغيير طبيعة العينات في ظل الظروف المشار إليها. في نهاية التمسخ ، قم بأجهزة الطرد المركزي ، وخلط ، والطرد المركزي ، والطرد المركزي للعينات مرة أخرى ، ووضع جميع الأنابيب في رف أنبوب على الجليد.

باستخدام الشكل كدليل ، أضف 10 ميكرولتر من الستربتافيدين بيروكسيداز الفجل إلى البئر D1 ، و 10 ميكرولتر من الجسم المضاد الثانوي المناسب للآبار D2 إلى D5 ، و 10 ميكرولتر من مخفف الأجسام المضادة لكل بئر في الصف B والبئر C1 ، و 10 ميكرولتر من الجسم المضاد الأولي المناسب للآبار C2 إلى C25 ، و 5 ميكرولتر من السلم الحيوي من أنبوب PCR رقم 1 إلى البئر A1 ، 3 ميكرولترات من العينة إلى الصفوف من A2 إلى A25 ، و 15 ميكرولترا من بيروكسيد اللومينول المحضر حديثا لكل بئر من الصف E.

يعد

سحب مزيج العينات والكواشف في البئر الصغير بالترتيب الصحيح أمرا بالغ الأهمية لنجاح التجربة ، لذلك يجب أن يتم ذلك بعناية فائقة.

ثم أضف 500 ميكرولتر من مخزن الغسيل إلى كل مخزن غسيل مخصص جيدا ، وقم بتدوير محتويات اللوحة عن طريق الطرد المركزي.