اختبار مناعي مغناطيسي قائم على الجسيمات النانوية باستخدام جهاز ميكروفلويديك

خذ جهازا مائعا دقيقا مثبتا على مرحلة المجهر ، ويتألف من مدخل لتوزيع الكواشف ، وقنوات مترابطة لتدفق السوائل ، ومنافذ لتطهير السوائل.

القناة الرئيسية على قيد مركزي متدرج مع جزيئات الحديد الدقيقة المجمعة المحاصرة.

يتم احتضان القنوات بمحلول مانع لمنع ارتباط الأجسام المضادة غير المحددة.

قم بتدفق مخزن مؤقت للغسيل ، وإزالة محلول الحجب الزائد.

إدخال معلق مركب مناعي بمعدل تدفق محدد. يتكون المركب المناعي من جسيمات نانوية مغناطيسية ، مغطاة بمستضدات مرتبطة بالأجسام المضادة الأولية ، والتي ترتبط أيضا بالأجسام المضادة الثانوية المترافقة مع البيروكسيديز.

تطبيق مجال مغناطيسي خارجي ، ومغنطة الجسيمات الدقيقة المجمعة وتحويلها إلى مصيدة مغناطيسية لالتقاط المجمعات المناعية.

أدخل ركيزة فلورية يتم تحويلها بواسطة البيروكسيديز إلى منتج فلوري وتتدفق عبر المصيدة.

باستخدام المجهر ، قارن التألق قبل وبعد المصيدة ، مما يؤكد التقاط المجمعات المناعية.

املأ القنوات بالماء المقطر باستخدام حقنة. اغمر الجهاز في حمام بالموجات فوق الصوتية لمدة 10 دقائق. بعد ذلك ، قم بإفراغ الماء داخل قنوات الجهاز واستخدم حقنة لإدخال محلول BSA بنسبة 5٪.

قم بإعداد تعليق من جزيئات الحديد الدقيقة بقطر 7.5 ميكرومتر في 5٪ BSA. احتضان الرقاقة وتعليق الجسيمات الدقيقة بمحلول الحجب لمدة 1 ساعة على الأقل في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك ، أدخل الجسيمات الدقيقة في الشريحة بإبرة حقنة من خلال خرطوم مخرج القناة الجانبية.

ضع الرقاقة عموديا ؛ ثم قم بتدوير الرقاقة في خطوتين بزاوية 90 درجة بحيث تستهدف الجسيمات الدقيقة وتضغط عند تقييد 5 ميكرومتر. أغلق جميع خراطيم جهاز الأكريليك بالحرارة. اقطع خرطوم المدخل حتى يتبقى بضعة ملليمترات فقط.

املأ إبرة الاستغناء بمحلول غسيل وأدخلها في خرطوم القطع. اسمح للمحلول بالتنقيط ، ثم قم بتوصيل الإبرة بالجهاز. اقطع خرطوم المخرج من القناة الجانبية ، ثم قم بتوصيله بمضخة الحقنة. بعد ذلك ، كرر نفس الإجراء لخرطوم مخرج القناة الرئيسية ، ثم قم بتوصيل الشريحة بالمغناطيس.

للكشف عن المناعة ، حافظ على تدفق مخزن الغسيل لمدة 10 دقائق بمعدل 50 ميكرولتر في الساعة. قم بإزالة المخزن المؤقت المتبقي للغسيل من إبرة الاستغناء باستخدام ماصة دقيقة وأضف 50 ميكرولترا من تعليق الجسيمات النانوية. قم بتدفق تعليق الجسيمات النانوية لمدة 7 دقائق بمعدل تدفق 100 ميكرولتر في الساعة. بعد ذلك ، قم بتغيير معدل التدفق إلى 50 ميكرولتر في الساعة واستمر في التدفق لمدة 15 دقيقة أخرى.

قم بتغيير إبرة التوزيع ، وقم بتدفق مخزن الغسيل لمدة 10 دقائق بنفس المعدل. قم بإزالة مخزن الغسيل المتبقي من إبرة الاستغناء باستخدام ماصة دقيقة وأضف 100 ميكرولتر من الركيزة الفلورية. اضبط معدل التدفق ومعلمات الوقت لإدخال الركيزة وقياس التألق وخطوة الغسيل.

قم بتنشيط تدفق الإدخال للركيزة الفلورية لمدة 6 دقائق بمعدل 50 ميكرولتر في الساعة. قبل 15 ثانية من توقف تدفق الركيزة ، قم بتشغيل مضان المجهر. ابدأ التقاط الصورة باستخدام برنامج كاميرا المجهر قبل 10 ثوان من توقف الركيزة بوقت تعرض يبلغ 1,000 مللي ثانية.

انقر فوق زر البدء الخاص بمعلمة معدل التدفق المطلوبة مباشرة بعد توقف غسل الركيزة. قم بإجراء التصوير لمدة 6 دقائق بإطار واحد في الثانية. انقر فوق زر البدء الخاص بتدفق الغسيل مباشرة بعد توقف تدفق القياس المحدد.