طريقة تللوين مناعي متعددة الإرسال باستخدام الأجسام المضادة الأولية من نفس الأنواع المضيفة

خذ قسما ثابتا ونافذا للغدة الكظرية يتكون من قشرة ونخاع. عالجها بمحلول حمضي مغلي ، وكسر الروابط المتقاطعة الناجمة عن التثبيت لكشف القناع عن المستضد.

قم بحظر مواقع الارتباط غير المحددة وأدخل الأجسام المضادة الأولية المرتبطة بعلامات خاصة بالقشرة.

أضف الأجسام المضادة الثانوية البيوتينيل التي تستهدف الأجسام المضادة الأولية والبيروكسيداز المترافق بالستربتافيدين المرتبط بالبيوتين.

أدخل تيراميد وبيروكسيد الهيدروجين الموسوم بالفلوروفور.

تستخدم البيروكسيداز المجمدة بيروكسيدات الهيدروجين لتنشيط التيراميد ، الذي يرتبط بالبروتينات القريبة ، مما يضع علامة على القشرة.

بعد ذلك ، عالج القسم بمخزن الغليان لتجريد الأجسام المضادة المرتبطة.

إدخال نفس الأجسام المضادة الأولية التي يتم إنشاؤها من الأنواع المضيفة والتي تستهدف علامات خاصة بالنخاع والأجسام المضادة الثانوية البيوتينيل.

إدخال بيروكسيداز مترافق بالستربتافيدين وتيراميد مترافق بالفلوروفور مختلف لتسمية النخاع.

إن تجريد الأجسام المضادة الأولية الخاصة بالقشرة يمنع الأجسام المضادة الثانوية المعاد إدخالها ، مما يمنع التفاعل المتبادل.

ضع بقعة نووية وقم بإجراء التصوير لتصور القشرة والنخاع الملطخين بشكل واضح ، مما يؤكد عدم وجود تفاعل متبادل للأجسام المضادة.

قبل التلوين ، قم بإزالة الشمع وإعادة ترطيب الشرائح المثبتة بالفورمالين والمدمجة في البارافين مع غم