موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 5:01 دقيقة • July 8th, 2025
خذ تشريح أنسجة سرطان الخلايا الكلوية بالتبريد الذي يظهر خلايا CD8 + T المتسللة في بيئتها المكروية للورم.
عالجها بالأسيتون لإصلاح الأنسجة وتنفاذها. يغسل لإزالة الأسيتون الزائد.
أضف أفيدين لتشبع بيوتين الأنسجة الداخلية. بعد ذلك ، أضف البيوتين لمنع مواقع ربط أفيدين الجمودة ، مما يقلل من التفاعلات غير المحددة.
ضع مصلا يحتوي على الغلوبولين المناعي لمنع مستقبلات الخلايا المناعية ، مما يمنع ارتباط الأجسام المضادة غير المحددة.
أضف كوكتيلا أوليا للأجسام المضادة يستهدف CD8 ، وهي علامة الخلايا التائية السامة للخلايا ، و PD-1 و Tim-3 ، المستقبلات المثبطة التي يتم التعبير عنها بواسطة مجموعات الخلايا التائية CD8 + المقاومة للعلاج المناعي.
إدخال أجسام مضادة ثانوية مميزة تحمل علامة الفلوروفور تستهدف الأجسام المضادة ل CD8 و Tim-3.
أضف الأجسام المضادة الثانوية الحيوية التي تستهدف الأجسام المضادة ل PD-1 وارتباط ستربتافيدين مختلف المسمى بالفلوروفور بالبيوتين.
ضع وسيطا مثبتا يحتوي على صبغة على تلطيخ نوى الخلايا وضع غطاء للملابس.
احصل على صور مضان متعددة الأطياف لتحديد خلايا CD8 + T المتسللة للورم والمجموعات السكانية الفرعية المقاومة للعلاج المناعي التي تعبر عن PD-1 أو Tim-3 أو كليهما.
بعد الذوبان ، استخدم منشفة ورقية لتجفيف الشرائح بعناية حول أقسام الأنسجة ، وقم بتطويق الأنسجة بقلم حاجز كاره للماء. عند
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية