طريقة في المختبر لتحديد الخلايا المناعية الفطرية والتكيفية الموجودة في رئتي الفئران

خذ أنسجة رئة الفئران المفرومة في عازلة الهضم واحتضانها عند درجة حرارة فسيولوجية.

تعمل

الإنزيمات العازلة على تكسير مصفوفة الأنسجة ، مما يؤدي إلى إرخاء الخلايا.

ثلاثي لفصل الكتلة الخلوية ، وتصفية التعليق باستخدام مصفاة لعزل الخلايا المفردة.

جهاز طرد مركزي لإزالة المادة الطافية مع بقايا الأنسجة. احتضان الخلايا بمخزن مؤقت للتحلل لتحلل خلايا الدم الحمراء.

جهاز طرد مركزي للتخلص من المادة الطافية المحتوية على الحطام الخلوي. أعد تعليق الخلايا ونقلها إلى صفيحة دقيقة.

أضف أجساما مضادة لمنع مستقبلات Fc ، مما يمنع تلطيخ الخلفية.

تقديم كوكتيل الأجسام المضادة المسمى بالفلوروفور الذي يستهدف علامات سطحية محددة على الخلايا المناعية الفطرية - الخلايا الوحيدة ، والضامة ، والخلايا المتغصنة ، والخلايا القاتلة الطبيعية ، والعدلات ، واليوزينيات ، والخلايا المناعية التكيفية - الخلايا الليمفاوية B و T.

إصلاح الخلايا وتنفغلها. أضف الأجسام المضادة المسماة بالفلوروفور الخاصة بعلامة داخل الخلايا على الخلايا الوحيدة والضامة والخلايا المتغصنة والحمضات.

باستخدام قياس التدفق الخلوي ، قم بتصنيف الخلايا المناعية المصنفة.

انقل الرئة إلى طبق بتري. افرمه باستخدام مشرطين ناعمين ، ثم ضعه في أنبوب مخروطي سعة 50 مل. أضف 5 مل من محلول الهضم لغسل اللوحة. قم بتأمين غطاء الأنبوب ، وهضم الرئة لمدة 30 دقيقة على شاكر مداري بسرعة