موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 4:50 دقيقة • January 15th, 2026
ابدأ بأنبوب يحتوي على العدلات. أضف عازلة تحتوي على مثبط البروتيناز لمنع تدهور البروتين.
أضف منظفا مناسبا لاختراق غشاء العدلات
في حمام جليدي ، صوتنة العينة بموجات صوتية عالية التردد لتعطيل غشاء الخلية ، وإطلاق محتويات داخل الخلايا ، بما في ذلك البروتينات المختلفة.
باختصار جهاز طرد مركزي لجمع المحتويات من جدران الأنبوب ونقلها إلى أنبوب مناسب.
أدخل عاملا مختزلا واحتضانه عند درجة حرارة عالية لتعزيز انقسام رابطة ثاني كبريتيد ، مما يتسبب في تشويه البروتينات.
قم بتبريد وإدخال كاشف مؤلكل يعمل على تقييل مجموعات السلفهيدريل.
أضف الأسيتون البارد للحث على ترسيب البروتين.
أجهزة الطرد المركزي لتكسير البروتينات وشظايا الخلايا. قم بإزالة المادة الطافية وجففها في الهواء.
إدخال عامل تغيير الطبيعة يحتوي على مخزن مؤقت وصوتنة لإعادة إذابة حبيبات البروتين.
أخيرا ، أضف مزيج البروتياز الذي يشق البروتينات. قم بتخزين العينة لمزيد من المعالجة.
للبدء ، اجمع خلايا HL60 المتمايزة بالعدلات في أنبوب سعة 15 مليلتر عن طريق الطرد المركزي للعينات عند 400 مرة جم لمدة 5 دقائق.
اغسل حبيبات الخلية مرتين عن طريق إضافة 15 مل من PBS وأجهزة الطرد المركزي مرة أخرى عند 400 مرات جم لمدة 5 دقائق.
أضف 300 ميكرولتر من 100 ملليمولار Tris HCl الرقم الهيدروجيني 8.5 الذي يحتوي على قرص كوكتيل مثبط للبروتيناز لكل عينة ، وقم بتدويرها لفت
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية