موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 5:43 دقيقة • January 15th, 2026
خذ STop And Go Extraction أو STAGE Tip ، وهو عمود تنقية مصغر.
يحتوي الطرف على حبات سيليكا صغيرة مرتبطة بسلاسل هيدروكربونية طويلة لتنقية الببتيد القائم على التفاعل الكارهة للماء.
يغسل بمخازن احتوائية تحتوي على نسبة عالية من الأسيتونيتريل ، وإزالة شوائب الراتنج.
أدخل عازلة ملزمة وطرد مركزي ، مما يؤدي إلى موازنة العمود لربط الببتيد الأمثل.
قم بتحميل عينة ببتيد مهضومة مسبقا تم الحصول عليها من خلايا شبيهة بالعدلات متمايزة ، تحتوي على شظايا وشوائب الببتيد ، بما في ذلك الأملاح.
جهاز طرد مركزي لتمرير العينة عبر العمود. ترتبط شظايا الببتيد بسلاسل الهيدروكربونات عبر التفاعلات الكارهة للماء ، بينما تتم إزالة الأملاح.
أضف المخزن المؤقت للربط وجهاز الطرد المركزي ، وإزالة الشوائب المتبقية.
أدخل المخزن المؤقت العالي المحتوي على الأسيتونيتريل للشطف.
باستخدام حقنة ، قم بتمرير المخزن المؤقت عبر العمود. يرتبط الأسيتونيتريل بسلاسل الهيدروكربونات ، مما يؤدي إلى إزاحة شظايا الببتيد التي تتدفق مع المخزن المؤقت.
إجراء التنميط البروتيني لتحديد الببتيدات المنقاة.
للبدء، قم بتعبئة ثلاث طبقات من راتنج C18 في طرف ماصة سعة 200 ميكرولتر لإنشاء طرف STop And Go Extraction أو STAGE لكل عينة من الببتيد.
أوقف الهضم الأنزيمي لعينات الببتيد المحتضنة مسبقا عن طريق إضافة 1 × 10 أحجام من محلول التوقف. قم بالطرد المركزي لل
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية