قياس مستويات الغلوبولين المناعي G مقابل لقاح اختبار في مصل الفأر
موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 4:51 دقيقة • July 8th, 2025
ابدأ بلوحة متعددة الآبار مغطاة بلقاح اختبار وحظر مواقع التفاعل غير المحددة.
الحصول على عينة مصل من فأر محقون باللقاح الاختباري.
يحتويهذا المصل على الأجسام المضادة للغلوبولين المناعي G ، أو IgG ، التي تتعرف على لقاح الاختبار.
إلى الآبار المغلفة باللقاح ، أضف عينات المصل المخففة بشكل متسلسل.
ترتبط IgGs باللقاح. يغسل لإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة.
أضف الأجسام المضادة الثانوية المترافقة مع البيروكسيديز التي ترتبط ب IgGs. إزالة الأجسام المضادة الثانوية غير المرتبطة.
أضف ركيزة كروموجينيك. يتفاعل البيروكسيديز مع الركيزة ، مما يولد منتجا أزرق اللون.
أدخل حمضا لإيقاف التفاعل. التغيير في الأس الهيدروجيني يحول المحلول إلى اللون الأصفر.
باستخدام مقياس الطيف الضوئي ، قم بقياس كثافة اللون لكل بئر لتحديد تركيز IgG في عينة المصل.
بالنسبة لطلاء المستضد لمقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم ، أو لوحة ELISA ، قم بتخفيف مستضد بروتين HI إلى 10 ميكروغرام لكل مليلتر بمحلول طلاء ، وأضف 100 ميكرولتر من المستضد المخفف لكل بئر في لوحة ELISA. احتضن الطبق عند 4 درجات مئوية طوال الليل. بعد الحضانة ، اغسل الطبق ب 300 ميكرولتر من PBST لكل بئر.
أغلق الآبار ب 300 ميكرولتر من محلول الختم لكل بئر لمدة ساعتين عند 37 درجة مئوية. بعد ذلك ، قم بتخفيف ثلاثة ميكرولترات من مصل الفئران من كل مجموعة تجريبية 100 مرة ع
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية