موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 3:34 دقيقة • July 8th, 2025
ابدأ بخلايا الثدييات المصابة بالفيروس والتي تنتج كاسباسات متعددة ، بما في ذلك كاسباز 3.
أضف وسط نمو إلى بئر التحكم ووسط مكمل بمثبطات كاسباز 3 إلى بئر الاختبار.
في بئر التحكم ، يتعرف كاسباز -3 على البروتينات النووية الفيروسية والبروتينات المضيفة اللازمة لانتشار الفيروس ويحللها.
في بئر الاختبار ، يدخل المثبط إلى الخلية ، مما يثبط نشاط كاسباز 3 ويمنع تدهور البروتين.
إزاحة الخلايا من اللوحة. أضف كاشف التحلل والحرارة للحث على تحلل الخلايا ، وإطلاق البروتينات داخل الخلايا.
قم بتحميل كلتا العينتين على جل SDS-polyacrylamide و electrophorese لفصل البروتينات بناء على الحجم.
بعد الرحلان الكهربائي ، انقل الجل إلى غشاء نشاف.
عالج الغشاء بالأجسام المضادة الأولية ضد البروتينات النووية الفيروسية والبروتينات المضيفة.
اغسل وتراكب بالأجسام المضادة الثانوية المترافقة بالفلوروفور المرتبطة بالأجسام المضادة الأولية ، مما يؤدي إلى توليد نطاقات الفلورسنت.
يشير التألق العالي في عينة الاختبار إلى انخفاض الانقسام الفيروسي والبروتين المضيف بوساطة كاسباز -3 مقارنة بالسيطرة.
للبدء ، قم ببذور خلايا MDCK أو A549 في صفيحة زراعة خلية مكونة من 12 بئرا ، باحتضان الخلايا طوال الليل عند 37 درجة مئوية تحت جو من ثاني أكسيد الكربون بنسبة 5٪. في اليوم التالي ، قم بإزالة وسط الثقافة القديم من الخلايا واغسل الخلايا في كل بئر
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية