اختبار لقياس تراكم مسبار مضاد حيوي فلوري في الخلايا البكتيرية

خذ أنابيب الفحص التي تحتوي على عينات بكتيرية.

في عينة الاختبار ، أضف جزيئات مثبطة لمنع مضخة تدفق المضادات الحيوية للبكتيريا.

جهاز الطرد المركزي والتخلص من المادة الطافية.

أضف مجسات المضادات الحيوية المترافقة بالفلوروفور التي تدخل الخلايا البكتيرية.

في عينة التحكم ، تقوم مضخة التدفق ببثق المجسات في الوسط خارج الخلية.

في العينة المعالجة بالمثبط ، لا تستطيع مضخة التدفق المسدودة طرد المجسات ، مما يتسبب في تراكمها.

الطرد المركزي العينات. تخلص من المادة الطافية التي تحتوي على مجسات خارج الخلية.

أضف المخزن المؤقت للتحلل متبوعا بالليزوزيم لإضعاف جدار الخلية البكتيرية.

أداء دورات التجميد والذوبان ، والصوتنة ، والتعرض لدرجات الحرارة العالية لتحلل الخلايا.

الطرد المركزي. انقل المادة الطافية إلى غشاء مرشح.

اغسل واجمع المرشح الذي يحتوي على المجسات.

قياس شدة مضان المرشح.

تشير

شدة التألق الأعلى في العينات البكتيرية المعالجة بالمثبطات إلى فقدان وظيفة التدفق ، مما يؤدي إلى تراكم المسبار داخل الخلايا.

لتحليل تراكم المسبار ، قم بتجميع مخزونات الجلسرين من السلالات البكتيرية على ألواح أجار LB لحضانة ليلية عند 37 درجة مئوية. في صباح اليوم التالي ، اختر مستعمرة واحدة من الطبق للاستزراع بين عشية وضحاها في مرق ليزوجيني عند 37 درجة مئوية. في صباح اليوم التالي ، قم بتخفيف الثقافة الليلية بحوالي 50 ضعفا في وس