عزل الخلايا التائية القاتلة الطبيعية الثابتة من نموذج الفأر

ابدأ بحقن جليكوليبيد اصطناعي داخل الصفاق في الفأر.

تقوم الخلايا العارضة للمستضد ، أو APCs ، باستيعاب الجليكوليبيد وتقديمه عبر جزيء معقد التوافق النسيجي الكبير غير الكلاسيكي CD1d.

تهاجر APCs إلى الطحال وتتفاعل مع الخلايا التائية القاتلة الطبيعية الثابتة أو خلايا iNKT ، مما يؤدي إلى تنشيط خلايا iNKT وتكاثرها.

حصاد الطحال. فصله ميكانيكيا لتوليد معلق أحادي الخلية.

نقل الخلايا إلى أنبوب. أضف وسط تدرج الكثافة وجهاز طرد مركزي لفصل الخلايا الليمفاوية.

اجمع الخلايا الليمفاوية. أضف رباعيات CD1d المحملة بمستضد الجليكوليبيد والتي تتفاعل مع خلايا iNKT.

قم بإزالة رباعيات غير مرتبطة. تراكب مع الميكروبيدات المغناطيسية التي ترتبط بالفلوروفورات المرتبطة بالرباعي.

قم بإزالة الخرزات غير المقيدة وقم بتحميل تعليق الخلية على عمود مغناطيسي.

تحت المجال المغناطيسي ، يتم الاحتفاظ بخلايا iNKT المرتبطة بالخرزة في العمود بينما تتدفق الخلايا المتبقية من خلاله.

قم بإزالة العمود من المجال المغناطيسي. أضف مخزن مؤقت للشطف لمسح خلايا iNKT.

حقن فأر DBA / 1 العادي داخل الصفاق مع ألفا GalCer ، بجرعة 0.1 ملليغرام لكل كيلوغرام من وزن الجسم. بعد ثلاثة أيام من النمذجة ، بعد التخدير ، عزل طحال الفأر. قم بإعداد تعليق أحادي الخلية عن طريق قطع الطحال وطحنه في منخل 200 شبكة. اغسل تعليق الخلية باستخدام PBS. جهاز طرد مركزي عند 200