تقنية Ex Vivo لتصنيع الخلايا التائية لمستقبلات المستضد الخيمري
موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 4:38 دقيقة • July 8th, 2025
خذ الخلايا التائية الأولية ، الممزوجة بخرز مغناطيسي مترافق بالأجسام المضادة في وسط مكمل بالإنترلوكين -2 ، واحتضنها.
ترتبط الأجسام المضادة ب CD3 في مركب مستقبلات الخلايا التائية والمستقبلات التحفيزي المشترك CD28 ، بينما يرتبط الإنترلوكين -2 بمستقبله المماثل ، مما يتسبب في تنشيط الخلايا التائية وتكاثرها.
إدخال نواقل الفيروسات العسقرية مع الحمض النووي الريبي المعدل وراثيا الذي يشفر مستقبلات مستضد خيميري أو CAR ، واحتضانه.
عند اندماج غشاء الخلايا المتجهة ، يخضع الحمض النووي الريبي الفيروسي لنسخ عكسي في الحمض النووي ، ويتكامل في جينوم المضيف.
تعبر الخلايا التائية المنقولة عن CARs المرتبطة بالسطح.
حصاد الخلايا على فترات محددة.
للحفظ بالتبريد ، خذ حصة من الخلايا ، وافصل الخرزات المربوطة عن طريق سحب العينات ، وافصلها مغناطيسيا.
قم بتدوير الخلايا وإعادة تعليقها في وسط الحفظ بالتبريد.
قم بتجميد الخلايا وتخزينها في درجة حرارة مبردة.
لتقييم تعبير CAR ، خذ حصة أخرى من الخلايا ، وقم بتدوير الخلايا ، وأعد تعليقها في مخزن مؤقت.
أدخل جسما مضادا يحمل علامات فلورية خاصة ب CAR واكتشف تعبير CAR باستخدام قياس التدفق الخلوي.
قم بتنشيط الخلايا التائية البشرية الأولية الطازجة أو المحفوظة بالتبريد عن طريق مزجها مع الخرز المغناطيسي المضاد ل CD3 / CD28 بنسبة 3 حبات لكل خلية تائية في آبار أطباق الاستزراع. استز
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية