تثبيط الالتهام الذاتي القائم على siRNA في الخلايا المتغصنة غير الناضجة المصابة بفيروس الهربس البسيط

خذ قطعتين من الكوفيت بالتثقيب الكهربائي. يحتوي أحد الكوفيت على RNA صغير متداخل ، أو siRNA ، مصمم لتثبيط إنتاج FIP200 ، وهو بروتين محفز للالتهام الذاتي.

يحتوي

الكوفيت الثاني على siRNA مخفوق كعنصر تحكم لا يمنع إنتاج FIP200.

أضف الخلايا المتغصنة غير الناضجة ، أو iDCs ؛ المثق الكهربائي للدخول الخلوي ل siRNA ثم صفيحة الخلايا.

يرتبط siRNA الداخلي بمركب إسكات يحفز الحمض النووي الريبي.

يشق المركب الذي يحتوي على siRNA الخاص ب FIP200 mRNA المستهدف ، مما يثبط إنتاج FIP200 ، بينما تنتج iDCs المعالجة ب siRNA FIP200.

احصد الخلايا وأضف فيروس الهربس البسيط. عند اندماج غشاء الخلية المغلفة الفيروسية ، يدخل الحمض النووي المنبعث إلى النواة ويؤدي إلى إنتاج البروتينات الفيروسية والنوكليوكابسيدات.

البروتينات الفيروسية تعطل اللامين النووي. يشكل FIP200 مركبا يؤدي إلى سلسلة إشارات ، مما يؤدي إلى الالتهام الذاتي لللامين المعطل لاستهدافها من أجل التحلل وتسهيل هروب النيوكليوكابسيدات الفيروسية إلى السيتوبلازم.

يقيد تثبيط إنتاج FIP200 بوساطة siRNA الالتهام الذاتي اللامين ، مما يمنع هروب نوكليوكابسيد.

الخلايا جاهزة لتقييم تثبيط الالتهام الذاتي الناجم عن siRNA.

في اليوم 3.5 بعد الالتصاق ، قم بنقل 12 مليون iDCs إلى أنبوب سعة 50 ملليلترا. قم بالطرد المركزي بمعدل 300 مرة جم لمدة 5 دقائق ، ثم تخلص من المادة الطافية. ف