JoVE Encyclopedia of Experiments
علم المناعة
0 مشاهدات • 2:12 د • July 8th, 2025
ابدأ بأنثى فأر مخدر في وضع ضعيف ، تحمل أورام الظهارة البولية في ظهارة المثانة.
قم بتأمين الأرجل الخلفيتية ، وحدد موقع فتحة مجرى البول ، وأدخل قسطرة في مثانة الفأر. اغسل المثانة لإزالة البول.
حقن بروتين منشط العدلات المنشط للهيليكوباكتر بيلوري، أو HP-NAP — وهو بروتين بكتيري معدل المناعة.
في البيئة المكروية للورم ، يتفاعل HP-NAP مع المستقبلات الشبيهة ب Toll على العدلات ويبدأ سلسلة إشارات ، مما يزيد من تعبير السيتوكين المسبب للالتهابات.
تؤديالسيتوكينات إلى تمايز الخلايا الليمفاوية التائية النازحة إلى مساعد من النوع 1 T ، أو Th1 ، والنوع 1 السامة للخلايا ، أو Tc1 ، الخلايا الليمفاوية التي تنتج الإنترفيرون جاما.
يمنع الإنترفيرون جاما تكوين أوعية دموية جديدة ، مما يحد من توافر المغذيات والأكسجين للورم.
بالإضافة إلى ذلك ، فإنه ينظم جزيئات معقد التوافق النسيجي الكبير المقدم لمستضد الورم على الخلايا السرطانية ، مما يسهل التفاعل مع خلايا Tc1.
ينتج عن هذا التفاعل إطلاق جزيئات سامة للخلايا تحفز موت الخلايا السرطانية ، مما يدل على فعالية HP-NAP المضادة للورم.
بعد ثلاثة أيام على الأقل من حقن خلايا MB-49 ، بعد تخدير الحيوان ، قم بالقسطرة كما هو موضح للتو وباستخدام حقنة سعة 1 مليلتر مع 200 إلى 300 ميكرولتر من PBS المعقم ، اغسل البول المتبقي من المثانة ، وشفط كل السائل.
حقن 50 ميكروغراما من البروتين المنشط للعدلات أو HPNAP لكل 150 ميكرولتر من PBS في المثانة ، مع ترك المحقنة متصلة بالقسطرة لتجنب التسرب. بعد ساعة ، قم بإزالة القسطرة برفق من مجرى البول وضع الفأر في قفص أسفل مصباح التدفئة حتى يستيقظ.