علاج قائم على الخلايا لالتهاب المفاصل المناعي الذاتي في نموذج الفئران

خذ الخلايا التائية التنظيمية المشتقة من iPSC ، أو Tregs ، التي تعبر عن مستقبلات خاصة بالبيضا. حقنهم في وريد ذيل الفأر المقيد.

تصل الخلايا إلى الغشاء الزليلي المبطن للسطح الداخلي لكبسولة مفصل الركبة.

بعد ذلك ، قم بإعطاء ألبومين مصل الأبقار الميثيل أو mBSA ، المستحلب بمادة مساعدة.

تعمل المواد المساعدة على تعزيز عرض mBSA للخلايا العارضة للمستضد ، أو APCs ، التي تعالج الشظايا وتقدم عبر جزيئات معقد التوافق النسيجي الكبير.

تهاجر APCs إلى الغدد الليمفاوية ، مما يؤدي إلى تنشيط الخلايا التائية. تهاجر الخلايا التائية المنشطة إلى مفصل الركبة.

حقن mBSA وحده و mBSA مع البيضا في مفصل الركبة الأيمن والأيسر ، على التوالي.

في الركبة اليسرى ، تقدم APCs شظايا mBSA للخلايا التائية المنشطة ، مما يؤدي إلى إطلاق السيتوكين المؤيد للالتهابات ويؤدي إلى تلف الأنسجة وتورم المفاصل ، والذي يسمى التهاب المفاصل.

في الركبة اليمنى ، يتفاعل Tregs مع APCs التي تقدم البيضا ويطلق السيتوكينات المضادة للالتهابات ، مما يقلل من تلف الأنسجة وتورم المفاصل ، وبالتالي يخفف من التهاب المفاصل.

ابدأ بفصل المزارع الخلوية ذات الأهمية باستخدام التربسين ، وإعادة تعليق كل نوع من الخلايا في 10 ملليلتر من الوسط الجديد. ضع كل مزرعة خلية في طبق جديد طوله 10 سم ، واسمح للخلايا المغذية بالالتصاق في حاضنة زراعة الخلايا. بعد 30 دقيقة, جمع iPSCs العائمة, وتمرير الثقافات من خلال مصافي الخلايا الفردية 70 ميكرون لإزالة مجموعات الخلايا للعد.

أعد تعليق كل مزرعة بتركيز 1.5 × 10⁷ خلايا لكل مليلتر في PBS البارد ، وقم بالتصفية مرة أخرى حسب الضرورة. بعد ذلك ، ضع أنثى الفئران C57BL6 التي تتراوح أعمارها بين 4 و 6 أسابيع واحدة تلو الأخرى في مصفاة صغيرة ، وانقل 200 ميكرولتر من نوع واحد من الخلايا لكل فأر إلى وريد ذيل كل.

استخدم فرجار مقياس الاتصال الهاتفي لقياس تورم كلتا الركبتين لتحديد القياس الأساسي. بعد 10 أيام من نقل الخلية ، استخدم حقنة سعة 1 مليلتر لحقن الفئران ب 100 ميكروغرام من BSA الميثيلي المستحلب في مساعد فرويند الكامل عند قاعدة ذيل كل تجريبي.

بعد 17 يوما من نقل الخلية ، قم بتحفيز التهاب المفاصل عن طريق الحقن داخل المفصل من 20 ميكروغراما من BSA الميثيل في 10 ميكرولتر من PBS في مفصل الركبة اليسرى و 20 ميكروغراما من BSA الميثيلي ، و 100 ميكروغرام من البيضا الكامل في 10 ميكرولتر من PBS في مفصل الركبة الأيمن لكل مخدر يتم نقله بالتبني.

بعد سبعة أيام من إحداث التهاب المفاصل ، قم بقياس الركبتين مرة أخرى لحساب النسبة المئوية للزيادة في قطر الركبة واستئصال الرضفة جراحيا. إصلاح المفاصل في الفورمالين. ثم ، بعد إزالة الكلس في EDTA ، قم بتضمين الركبتين في البارافين ، واحصل على أقسام 4 ميكرون للتلوين والتحليل الكيميائي النسيجي.