توصيل الخلايا الليمفاوية التائية المستجيبة إلى الفئران التي تحمل أورام الدماغ البشرية

خذ فأرا مخدرا يعاني من نقص المناعة يحمل ورما في الدماغ البشري المطعم.

قم بإزالة الفراء من موقع الجراحة وتطهيره. ضع مرهما على العينين لمنع جفاف القرنية.

ضع الماوس على إطار تجسيمي مع وسادة تدفئة للحفاظ على درجة حرارة الجسم.

قم بعمل شق في فروة الرأس ، وكشف الجمجمة.

حدد موقع البريجما ، وهو معلم بارز على الجمجمة ، وحدد موقع الحقن لوضع حقنة دقيقة فوقها.

تحتوي

المحقنة المجهرية على تعليق من الخلايا الليمفاوية التائية المستجيبة الخاصة بالورم من متبرعين بشريين أصحاء.

قم بعمل ثقب في موقع الحقن على الجمجمة ، وتجنب إصابة الدماغ. حقن الإبرة في الدماغ وحرر الخلايا الليمفاوية التائية المستجيبة ببطء في موقع الورم.

اسحب الإبرة جزئيا واحتفظ بها في مكانها ، مما يمنع تسرب الخلايا المحقونة ، قبل سحب الإبرة تماما.

أغلق الشق واترك الماوس يتعافى.

تأكد من تخدير بشكل كاف عن طريق قرصة إصبع القدم ، ثم قم بإزالة الفراء من موقع الجراحة بين الأذنين وحتى الأنف. قم بتعليق الخلايا ببطء لمنع تكتل الخلايا ، وتحميل تعليق الخلية في حقنة بعناية فائقة لتجنب وجود الفقاعات.

ثم ضع المحقنة في مضخة الحقنة المعدلة. قم بتطهير موقع الجراحة بمسحة مبللة بمحلول بوفيدون اليود 5٪ ، وضع مرهم ترزيق للعيون في عيون الفأر لمنع جفاف القرنية. بعد ذلك ، ضع الماوس المخدر على الإطار التجسيمي على كتلة متساوية الحرارة دافئة. ضع أنف الفأر وأسنانه فوق قضيب الأسنان بشكل مناسب. شد قضبان الأذن بإحكام في آذان الماوس لشل حركة الرأس. احرص على عدم إتلاف طبلة الأذن.

تعريض التنفس للخطر وتأكد من أن الرأس ثابت جيدا. قم بعمل شق جلدي سهمي في خط الوسط بمقص معقم على طول الجزء العلوي من الجمجمة لكشف الجمجمة. حدد تقاطع الهياكل السهمية والإكليلية لتكون بمثابة معالم للتوطين التجسيمي ، وضع المحقنة فوق هذه النقطة.

حرك المحقنة بإحداثيات محددة مسبقا 2 ملليمتر جانبي و 0.5 ملم داخلي من البرجما. باستخدام مثقاب صغير ، قم بعمل ثقب صغير في الجمجمة باستخدام مثقاب معقم. احرص على البقاء سطحيا لتجنب إصابة الدماغ.

أدخل المحقنة بعناية في الحفرة المحفورة. تحرك ببطء إلى الأمام الإبرة 3 ملليمتر لأسفل في الجافية ، ثم للخلف 0.5 ملم إلى العمق النهائي 2.5 ملم قبل الحقن.

قم بتشغيل حقن الخلية بمعدل 2 أو 3 ميكرولتر في الدقيقة وراقب الفئران طوال وقت الحقن. بمجرد اكتمال الحقن ، اسحب الإبرة لمدة 1 ملم فقط ، واحتفظ بالمحقنة في مكانها لمدة دقيقة إضافية قبل سحب المحقنة ببطء بالكامل لمنع أي تسرب من موقع التسريب. قم بإزالة بعناية من الإطار التجسيمي.

أغلق الجلد بخياطة جراحية مناسبة وضع جل ليدوكائين 2٪ مباشرة على الجرح. انقل الماوس المخدر إلى القفص الخاص به فوق وسادة التسخين المضبوطة على 37 درجة مئوية للحفاظ على درجة حرارة جسم الفأر المناسبة حتى الشفاء التام من التخدير.