توليد نموذج فأر BLT مزدوج (نخاع العظام والكبد والغدة الصعترية)

ابدأ بفأر مخدر يعاني من نقص المناعة ويفتقر إلى الخلايا المناعية.

عالج الفأر بجرعة شبه مميتة من الأشعة السينية للتخلص من الخلايا الجذعية الموجودة من نخاع العظام.

قم بتشريح الفأر وتوصيل شظايا من كبد الجنين البشري وأنسجة الغدة الصعترية بين الكلية وكبسولتها.

أغلق الشق.

ينمو الكبد المزروع وأنسجة الغدة الصعترية ، وتشكل عضيات ، وهي مجاميع خلوية تشبه العضو.

بعد الشفاء ، قم بحقن الخلايا الجذعية المكونة للدم أو الخلايا الجذعية المكونة للدم في الوريد الذيل.

تهاجر الخلايا الصلبة العصبية المحقونة إلى العضوية الصعترية ونخاع العظام ، وتتمايز إلى خلايا مناعية بشرية مختلفة.

قم بتوفير الماء المكمل بالمضادات الحيوية للفأر لقتل ميكروبات الأمعاء الموجودة.

باستخدام أنبوب فموي ، أدخل ميكروبات البراز البشري مباشرة في أمعاء الفأر لتعزيز الاستعمار الميكروبي.

ينتج عن هذا تطوير نموذج فأر BLT مزدوج متوافق مع البشر يتميز بجهاز المناعة البشري وميكروبات الأمعاء.

لزرع أنسجة الكبد والغدة الصعترية في كبسولة الكلى اليسرى ، ضع الفأر أولا في غطاء المحرك. في يوم الجراحة ، عالج الفئران بإشعاع شبه مميت لكامل الجسم بجرعة 12 سم رمادي لكل جرام من وزن الجسم. احلق كل فأر حول الجانب الأيسر الجانبي والوسطي بعد التأكد من المستوى المناسب من التخدير. ضع مرهما للعيون على عيون ، وقم بتطبيق علامة الأذن حسب الحاجة ، وقم بتطهير الجلد بثلاثة مقشرات متتالية من اليود و 70٪ من الأيزوبروبانول.

عندما يتم تحضير الجلد ، استخدم الملقط لتحميل جزء من 1 إلى 1.6 ملم مكعب من أنسجة كبد الجنين البشري في مبزل ، متبوعا بجزء واحد من 1 إلى 1.6 ملم مكعب من أنسجة الغدة الصعترية للجنين البشري. استخدم الملقط لرفع الجلد ، واستخدم مشرطا لعمل قطع طولي صغير في الجلد. قم بتمديد القطع إلى 1.5 إلى 2 سم على الجانب الأيسر من الماوس ، واستخدم الملقط لرفع طبقة العضلات. استخدم المقص لفتح طبقة العضلات طوليا ، وتمديد الجرح حسب الضرورة ، لكشف الكلى ، وإمساك الأنسجة الدهنية المحيطة بالكلى برفق.

استخدم مشرطا لعمل شق من 1 إلى 2 ملم في الطرف الخلفي من كبسولة الكلى وأدخل المبزل المحمل مسبقا ببطء في الشق ، بالتوازي مع المحور الطويل للكلي. حرر الأنسجة بين كبسولة الكلى والكلى، وأعد الكلى والأمعاء إلى مواقعها الطبيعية. بعد ذلك ، استخدم الغرز لإغلاق طبقة العضلات ودبابيس جراحية لإغلاق الجلد. ضع الماوس في قفص عازل دقيق معقم مع المراقبة حتى الاستلقاء الكامل. بعد ست ساعات من الجراحة ، ضع الفئران تحت مصباح حراري وقم بتطهير الحكايات بنسبة 70٪ من الأيزوبروبانول.

حقن 1.5 إلى 5 × 10⁵ خلايا جذعية مكونة للدم إيجابية CD34 في 200 ميكرولتر من PBS في وريد ذيل واحد موسع لكل. ثم أوقف أي نزيف بضغط لطيف وأعد الفئران إلى قفص منزلها. بعد 9 إلى 12 أسبوعا من الجراحة، استخدم مقيدا بلاستيكيا مخروطيا بحجم مناسب لعزل ساق واحدة من فأر متوافق مع البشر ورش الجانب الإنسي من الساق المعزولة بنسبة 70٪ من الأيزوبروبانول. انشر المضادات الحيوية ومرهم مسكن للألم على موقع التجميع.

باستخدام إبرة قياس 25 مثبتة بزاوية 90 درجة ، قم بثقب الوريد الصافن لجمع 50 إلى 100 ميكرولتر من الدم في أنبوب جمع الدم المغطى ب EDTA. عندما يتم الحصول على كمية مناسبة من الدم ، اضغط على الموقع بقطعة الشاش المعقمة لوقف النزيف قبل إعادة الفأر إلى قفصه. بعد ذلك ، استخدم عينة الدم المحيطية التي تم جمعها لتقييم مستوى إعادة تكوين الخلايا المناعية البشرية عن طريق قياس التدفق الخلوي ، باستخدام الأجسام المضادة ضد CD45 و CD3 و CD4 و CD8 و CD19 والفأر CD45.

لجمع عينات البراز الطازجة ، ضع الأكياس الورقية الفردية المعقمة في غطاء الدخان ، وضع فأرا واحدا في كل كيس حتى يتغوط كل. بعد ذلك ، أعد الفئران إلى قفصها ، واستخدم ملقطا معقما لنقل كل عينة براز إلى أنبوب واحد سعة 1.5 مليلتر لكل فأر لتخزين 80 درجة مئوية تحت الصفر.

في نهاية العلاج بالمضادات الحيوية لمدة 14 يوما ، قم بتغيير مياه الشرب إلى ماء معقم ونقل الفئران إلى قفص جديد معقم. بعد 24 و 48 ساعة من الإقلاع عن تناول المضادات الحيوية ، املأ المصادر المعدة بشكل صحيح من مواد زرع الجراثيم البرازية وقم بنقل العينات في غرفة لاهوائية في ظل ظروف لاهوائية.

لإجراء عملية زرع البراز ، قم بتسليم 200 ميكرولتر من مادة زرع الجراثيم البرازية عبر التزقيم الفموي لكل تجريبي ، ونشر أي مادة مذابة متبقية على فراء الفئران المتوافقة مع البشر أو على فراش القفص.