توليد نموذج جلدي جرح الأغنام خارج الجسم الحي مصاب بممرض بكتيري

خذ قسما من خزعة الجلد المعقمة مسبقا تم الحصول عليه من جبين الحمل في وسط خال من المضادات الحيوية.

يتكون القسم من بشرة خارجية وطبقة أدمة أساسية.

قم بإزالة الوسيط واستخدم حاجزا لغسل القسم.

قم بعمل قطع دائري في القسم وإزالة الطبقة العليا. هذا يكسر الحاجز ، مما يؤدي إلى إنشاء فراش جرح في الجلد.

انقل الأقسام المصابة إلى غشاء قابل للاختراق في صفيحة متعددة الآبار تحتوي على وسط خال من المضادات الحيوية.

أدخل تعليقا من البكتيريا المسببة للأمراض على فراش الجرح واحتضانه.

أثناء الحضانة ، يوفر سرير الجرح سطحا نسيجيا للارتباط البكتيري والعناصر الغذائية لدعم نمو البكتيريا.

هذا يسمح بتكاثر البكتيريا وانتشارها عبر فراش الجرح ، مما يؤدي إلى حدوث عدوى.

لإصابة عينة الجلد ، قم بإعداد صفيحة جديدة من 24 بئرا تحتوي على 400 ميكرولتر من الوسائط الخالية من المضادات الحيوية الدافئة مسبقا ، وأضف الحشوات المكونة من 24 بئرا باستخدام ملقط معقم. قم بإزالة الوسائط من عينات الجلد ، واغسلها ب 500 ميكرولتر من PBS المعقم ، ثم قم بإزالة الغسيل.

استخدم ملقطا معقما لتثبيت العينة برفق في قاع البئر. استخدم خزعة ثقب 4 ملم لاختراق عينة الجلد إلى عمق تقريبي من 1 إلى 2 ملم ، وعمل سديلة جرح مركزية. بعد ذلك ، استخدم مشرطا ذو الشفرة رقم 15 وملقط أنسجة أليس ذو أسنان معقمة لإزالة الطبقة العليا من سديلة الجرح.

بمجرد إصابة جميع العينات