تقييم آثار زرع الجراثيم البرازية في فأر يعاني من نقص إنترلوكين 10

ابدأ بفأر مقيد يفتقر إلى الإنترلوكين 10 ، وهو سيتوكين مضاد للالتهابات ، مما يؤدي إلى التهاب القولون.

خذ حقنة مملوءة بمعلق براز غني بميكروبات الأمعاء المتنوعة ، من فأر سليم.

بعد ذلك ، قم بإرفاق أنبوب فموي بالمحقنة.

أدخل هذا الأنبوب في الفم ، ووجهه لأسفل إلى معدة الفأر.

الآن ، قم بإدارة تعليق البراز مباشرة في المعدة ، مما يسمح له بالوصول تدريجيا إلى القولون.

بمجرد دخولها القولون ، تتكاثر الميكروبات البرازية وتستعمر ، وتعيد تكوين ميكروبات الأمعاء.

ثم تطلق الميكروبات المستعمرة مستقلبات ثانوية مختلفة.

تساعد هذه المستقلبات في إنتاج الميوسين ، الذي يصلح ظهارة القولون ويعيد سلامة الأمعاء.

داخل ظهارة القولون ، تتفاعل الميكروبات البرازية ومستقلباتها مع الخلايا المناعية.

يتسبب هذا التفاعل في إفراز الخلايا المناعية للسيتوكينات المضادة للالتهابات ، مما يؤدي إلى تقليل التهاب القولون في الفأر الذي يعاني من نقص الإنترلوكين 10.

تحضير محلول معقم عن طريق إضافة محلول الجلسرين بنسبة 10٪ إلى محلول ملحي عادي. أضف 10 مل من هذا المحلول إلى الأنبوب المخروطي لكل جرام من الكريات البرازية. قم بتجانس هذا الخليط بسرعة منخفضة ثلاث مرات لمدة 30 ثانية ، باستخدام الخالط الموجود على المنضدة داخل غطاء الدخان لإعادة تعليق البراز. قم بتصفية معلق البراز من خلال طبقتين من شاش القطن المعقم. قم بتخزين المرشح مؤقتا في الثلاجة لمدة تصل إلى ست ساعات ، أو قم بتعبئته في قوارير معقمة مبردة ، وقم بتخزينه في ثلاجة 80 درجة تحت الصفر.

قم بتنظيف الخالط أو الخلاط جيدا باتباع الإجراء القياسي. قم بإذابة معلق البراز المجمد على الثلج إذا كنت تستخدم عينات مجمدة. امزج معلق البراز المذاب عن طريق الدوامة. انقل معلق البراز الطازج أو المذاب إلى محاقن سعة 1 ملليلتر. قم بوزن الفئران واختر حجم إبرة التزقيم المناسب والحد الأقصى لحجم الجرعة.

اختبر إبرة التزقيم عن طريق قياس الطول من طرف أنف الفأر إلى أسفل القص. املأ المحقنة بنسبة 10٪ من الجلسرين في تعليق ملحي أو براز ، وقم بإزالة فقاعات الهواء داخل المحقنة والإبرة. ضع قفصا واحدا من الفأر في خزانة السلامة الحيوية ، وقم بإزالة غطاء القفص البلاستيكي ، واترك الرف المعدني في مكانه.

افتح الرف المعدني بيد واحدة. أمسك فأرا واحدا من الذيل وضعه على الرف المعدني. أمسك الماوس من الذيل بيد واحدة ، واستخدم الإبهام والأصابع الوسطى في يد أخرى لكبح جماح عن طريق الإمساك بالجلد فوق الكتفين. مد رأس برفق للخلف وامسك الرأس في مكانه بيد واحدة. ضع إبرة التزقيم أعلى اللسان داخل الفم.

تقدم برفق على طول الحنك العلوي حتى تصل الإبرة إلى المريء. مرر الإبرة بسلاسة في حركة واحدة. بمجرد وضع الإبرة والتحقق منها بشكل صحيح ، قم بإدارة المادة ببطء عن طريق دفع المحقنة المتصلة بالإبرة. بعد الجرعات ، اسحب الإبرة برفق للخارج. ضع علامة على الماوس ، وأعده إلى قفص منزله. راقب لمدة 5 إلى 10 دقائق من خلال البحث عن علامات صعوبة التنفس أو الضيق. راقب الفئران مرة أخرى بين 12 إلى 24 ساعة بعد زرع الجراثيم البرازية.