JoVE Encyclopedia of Experiments
علم المناعة
0 مشاهدات • 3:06 د • July 8th, 2025
ابدأ بفأر مخدر يعاني من نقص المناعة يفتقر إلى الخلايا المناعية المختلفة.
تتم معالجة هذا الفأر المعدل وراثيا مسبقا بمضاد للفيروسات وعامل علاج كيميائي. يتفاعل العامل المضاد للفيروسات حصريا مع البروتينات الفيروسية الموجودة في خلايا الكبد المعدلة وراثيا ، مما يعزز القضاء عليها.
وفي الوقت نفسه ، يزيل عامل العلاج الكيميائي الخلايا الجذعية المنقسمة بنشاط في نخاع العظام ، مما يخلق مكانا مناسبا لتوليد الخلايا المناعية.
تشريح الفأر وفضح الطحال.
خذ معلق الخلية لخلايا الكبد البشرية والخلايا السلفية الجذعية المكونة للدم أو HSPCs وحقنها في القطب السفلي من الطحال.
ربط الطحال فوق موقع الحقن لتقييد الخلايا بالقطب السفلي وتسهيل دخولها إلى الدورة الدموية للفأر.
أغلق الشق.
تصل خلايا الكبد المحقونة إلى أنسجة الكبد وتؤسس خلايا الكبد البشرية في نموذج الفأر.
في نخاع العظام ، تتمايز HSPCs المهاجرة إلى خلايا مناعية بشرية مختلفة.
هذا يطور نموذجا مزدوجا للفأر مع خلايا الكبد البشرية والخلايا المناعية.
أولا ، قم بتوصيل أحد طرفي أنبوب التمديد المعقم بإبرة قياس 30 ، والطرف الآخر بحقنة سعة 1 ملليلتر. املأ المحقنة بتعليق ماصة التوزيع المتكررة وأجهزة التفريغ العالي والحقنة المجمعة. قم بتركيب المحقنة في شق ماصة الاستغناء المتكررة، واضبط الموزع لتوزيع 10 ميكرولتر في كل مكبسة. احلق كل فأرة كما هو موضح في بروتوكول النص ، وافرك الجانب الأيسر من جسم كل فأر بنسبة 10٪ بوفيدون يود ، متبوعا بكحول الأيزوبروبيل بنسبة 70٪.
باستخدام مقص من نوع Vannas ، قم بعمل شق صغير في الجلد والعضلات والصفاق على يسار الجدار البريتوني لدخول التجويف البريتوني حوالي 5 ملليمترات تحت الحافة السفلية للقفص الصدري. حدد موقع الطحال واستخدم الملقط لسحبه قليلا إلى منطقة التشغيل لسهولة الوصول إليه ، وأدخل الإبرة قياس 30 في القطب السفلي من الطحال.
بعد ذلك ، افتح مكبس ماصة الاستغناء ، وقم بتوزيع 10 ميكرولتر من الحجم في المرة الواحدة ، بحد أقصى 60 إلى 80 ميكرولتر لكل طحال. اسحب الإبرة ببطء ، وقم بقص الطحال بمشابك ربط باستخدام أداة الربط. بعد ذلك ، استخدم أدوات التطبيق ذات الرؤوس القطنية ، المبللة ب PBS المعقم ، لدفع الطحال مرة أخرى إلى تجويف الجسم. استخدم نمط خياطة متقطعة لإغلاق الطبقة العضلية لجدار البطن. أنجز إغلاق الجلد بنمط خياطة متقطعة باستخدام خيوط غير قابلة للامتصاص.