لماذا تهم التفاعلات الكهروستاتيكية في تكوين معقد mRNA والبوليمر؟

تسهل التفاعلات الكهروسكونية بين البوليمرات موجبة الشحنة وmRNA سالب الشحنة تكوين المعقدات البوليمرية (polyplex)، مما يعمل على استقرار mRNA ويمكّن دمجه في الجسيمات النانوية لاستخداماته في اللقاحات.

كيف يؤثر تركيز السكروز على استقرار المعقدات البوليمرية (polyplex) أثناء عملية التجفيف بالتجميد؟

يعمل محلول السكروز بتركيز 4% كواقي من التجمد يحافظ على السلامة الهيكلية للمركبات المتعددة (polyplexes) أثناء التجميد والتجفيف بالتجميد، مما يمنع إعادة التميؤ ويحافظ على استقرار الجسيمات النانوية لأغراض التخزين.

ما هي القياسات الكمية التي تمكن من تقييم كفاءة تشكيل المعقدات البوليمرية (polyplexes)؟

يتم تقييم تكوين معقدات mRNA-polymer من خلال الترسيب المرئي وإعادة التعليق في ماء خالٍ من RNase، مما يشير إلى النجاح في توليد الجسيمات النانوية واستقرارها.

لماذا تُعد تكرار خطوة تحضين البوليمر مع mRNA مهمة للتعاون متعدد الوظائف؟

يضمن التحضين المتسق لمدة 30 دقيقة عند 25 درجة Celsius تكوين معقدات بولي بلكس (polyplex) قابلة للتكرار، مما يتيح تبادل بيانات موثوقة بين فرق الصياغة والتحليل والفرق قبل السريرية.

ما هي قدرات التحليل الإحصائي المطلوبة قبل تنفيذ هذه الطريقة في سير عمل الاكتشاف؟

يتطلب التنفيذ القدرة على قياس ومقارنة مردود الـ polyplex وتوزيعه الحجمي واستقراره عبر الدفعات المختلفة، وذلك لدعم تحسين التركيبة بناءً على البيانات واتخاذ قرارات المضي قدماً أو التوقف.

صياغة الجسيمات النانوية المحملة بالحمض النووي الريبي المرسال لأغراض التطعيم

JoVE Encyclopedia of Experiments

علم المناعة

0 مشاهدات • 2:43 د • July 8th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ابدأ بمحلول بوليمر مجمد يحتوي على بوليمرات موجبة الشحنة.

قم بإذابة محلول البوليمر حتى يصل إلى درجة حرارة الغرفة.

أضف عازلة ودوامة للخلط المنتظم ، مما يؤدي إلى إنشاء حل متجانس.

أدخل mRNA المستهدف إلى محلول البوليمر بنسبة متساوية لتحقيق التفاعل الأمثل.

احتضان للسماح للبوليمرات الموجبة الشحنة بالتفاعل مع مجموعات الفوسفات سالبة الشحنة في الرنا المرسال عبر التفاعلات الكهروستاتيكية.

هذا يسهل دمج mRNA داخل بنية البوليمر ، وتشكيل جزيئات نانوية من مجمعات mRNA-polymer أو polyplexes.

انقل هذه البوليبلكس إلى أنبوب يحتوي على ماء خال من RNase.

امزجهم واتركي هطول الأسود.

أدخل عازلة تحتوي على السكروز وقم بتجميدها. يعمل السكروز كمادة للحمالات المجمدة التي تحافظ على السلامة الهيكلية للبولبلكس.

ثم قم بإجراء التجفيف بالتجميد لإزالة أي آثار للماء.

قم بتخزينه في درجة حرارة منخفضة كلقاح mRNA مرشح للاستخدام في المستقبل.

لتكوين polyplexes ، قم بإذابة البوليمرات المعدة مسبقا C-6 الببتيد والاسترات الأمينية بولي بيتا ودوامة المحلول. بعد سحب مزيج البوليمر لأعلى ولأسفل ، قم بإعداد محلول 12.5 ملليمولار في أسيتات الصوديوم. دوامة الحل وانتظر لمدة 10 دقائق.

بعد ذلك ، قم بإعداد mRNA بمعدل 0.5 ملليغرام لكل مليلتر واخلطه عن طريق سحب العينات. دوامة محلول البوليمر مرة أخرى. بعد ذلك ، قم بخلط محلول المادة الوراثية في محلول البوليمر بنسبة واحد إلى واحد في أنبوب طرد مركزي دقيق ، واحتضان الأنبوب عند 25 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة في كتلة حرارية. بعد الحضانة ، قم بترسيب الخليط بواحد إلى اثنين من الماء الخالي من RNase عن طريق إضافة العينة إلى أنبوب طرد مركزي دقيق يحتوي على الماء.

بعد ذلك ، لتضمين السواغات ، أضف 20 ملليمولار HEPES و 4 في المائة من محلول السكروز في نفس حجم خليط mRNA و poly-beta amino esters واخلطها عن طريق سحب العينات. للتجميد ، بعد تجميد محلول polyplex عند 80 درجة مئوية تحت الصفر لمدة ساعة واحدة ، قم بإجراء التجفيف الأولي ، ثم قم بتخزين polyplexes على الفور عند 20 درجة مئوية تحت الصفر لتجنب إعادة الجفاف.