بناء نموذج فأر متوافق مع البشر مع مناعة هندسية ضد فيروس نقص المناعة البشرية

تحضير فأر متلقي مخدر شديد نقص المناعة.

قم بعمل شق لكشف الكلى وإحداث ثقب في كبسولة الكلى.

خذ إبرة غرسة تحتوي على أنسجة الغدة الصعترية للجنين البشري والخلايا المشتقة من كبد الجنين المعلقة في خليط بروتين هلامي.

تشمل الخلايا الخلايا الجذعية المكونة للدم ، أو HSCs ، التي تعبر عن مستقبلات المستضد الخيمرية ، أو CARs ، التي تستهدف فيروس نقص المناعة البشرية.

زرع تعليق الخلية وأنسجة الغدة الصعترية تحت الكبسولة، ثم أغلق الشق.

بعد ذلك ، قم بحقن HSCs التي تعبر عن CAR بشكل رجعي واسمح للفأر بالتعافي.

في الكلى ، يتبلمر خليط البروتين الجيلاتيني في مصفوفة ، ويحتفظ ب HSCs في موقع الزرع.

تهاجر المصفوفة HSCs إلى الغدة الصعترية ، وتتمايز إلى خلايا تائية بشرية وظيفية.

وفي الوقت نفسه ، تصل الخلايا الجذعية السرطانية المحقونة إلى نخاع العظام وتتمايز إلى خلايا بائية بشرية وظيفية ، وحيدة ، وخلايا NK.

نموذج الفأر مع جهاز المناعة البشري ضد فيروس نقص المناعة البشرية جاهز الآن.

تسكب قطع الغدة الصعترية ومتوسطة من القارورة في طبق 60 ملم. قم بتبريد بعض أطراف ماصة الإزاحة الإيجابية عن طريق وضعها في أنابيب ذات غطاء لولبي معقم سعة 1.5 ملليلتر على الجليد. أيضا ، ضع كريات الخلية وحجم خليط البروتين الجيلاتيني ، مثل Matrigel ، على الثلج.

تخدير الفئران المتلقية بمخدر قابل للحقن وفقا لبروتوكول حيواني معتمد. تحقق من مستوى تخدير الفأر عن طريق الضغط على مخلب. يشير عدم وجود رد فعل على القرصة إلى مستوى جراحي للتخدير.

احلق الجانب الأيسر من كل فأر من الورك إلى الكتف ، بين منتصف الظهر والمعدة. تحت الجلد ، قم بحقن 6 ملليغرام لكل كيلوغرام من الكاربروفين المخفف في كتف أو المثلث الإربي. اغسل قنية المبزل باستخدام PBS في طبق 60 ملم. باستخدام زوج من الملقط المنحني غير الحاد ، ضع قطعة من الغدة الصعترية من الطبق الذي يبلغ طوله 60 ملم داخل فتحة القنية مباشرة ، ثم اسحب المبزل لشفط الأنسجة في القنية.

بعد ذلك ، استخدم ماصة الإزاحة الإيجابية وطرفا مبردا لإضافة 5 ميكرولتر من خليط البروتين الجيلاتيني البارد إلى الأنبوب مع حبيبات الخلية ، وحركها برفق لتوليد تعليق الخلية. قم بتعليق الخلية في فتحة القنية واسحب المبزل ببطء لتحميل الإبرة.

امسح المنطقة المحلوقة من الفأر بالبوفيدون واليود متبوعا بالأيزوبروبانول ثلاث مرات. تحديد أغمق بقعة تحت الجلد ، مما يشير إلى موقع الطحال. يبلغ طول الكلى حوالي 5 ملليمترات ظهرية للطحال.

بعد التأكد من مستوى مناسب من التخدير من خلال عدم وجود رد فعل على قرصة المخلب ، استخدم ملقطا منحنيا لرفع الجلد ، واستخدم المقص الجراحي لعمل شق 15 ملم في الجلد الموازي للطحال. ثم قم بعمل قطع مماثل في طبقة الصفاق أدناه.

في الذكور ، يمكن رؤية الكلى بسهولة ، وبالتالي يتم بثقها ببساطة عن طريق الضغط على البطن. ادعم الكلى باستخدام ملقط دموستاتي أو زوج من الملقط غير الحاد المنحني. في الإناث ، يميل المبيضان إلى منع الكلى من الاستخراج السهل. باستخدام مرقئ ، التقط المبيض وكشف الكلية بعناية.

استخدم ملقطا برأس إبرة لنتف ثقب صغير في الطرف الخلفي من كبسولة الكلى. حرك المبزل في هذه الفتحة وعلى طول الكلى حتى يتم تغطية فتحة القنية بالكامل بواسطة كبسولة الكلى. قم ببثق الأنسجة الموجودة أسفل كبسولة الكلى برفق واسحب المبزل للخارج. استخدم ملقطا منحنيا للتأكد من أن قطعة الغدة الصعترية لا تخرج بالإبرة.

بعد ذلك ، ارفع الصفاق بالملقط واستخدم الهيموسات برفق لدفع الكلية إلى مكانها. اربط غرزة مزدوجة العقد بخياطة جراحية في الصفاق. أيضا ، ضع مشابك الجرح التلقائية لإغلاق الجلد.

الآن ، امزج الخلايا الموجبة CD34 المنقولة واستنشق 0.5 × 10⁶ خلايا في حجم 100 ميكرولتر في حقنة الأنسولين. حقن هذه الخلايا في الفأر من خلال حقن الوريد المداري الرجعي.

بعد الحقن ، امسح قطرة صغيرة من زيوت تشحيم العين على كل عين وضع الفأر على جانبه في قفص. بعد زرع جميع الفئران ، تأكد من أن قد استعادت وعيها وهي متنقلة قبل إعادتها إلى غرفة السكن.