توليد حويصلات غشاء البلازما من الخلايا الجذعية لنخاع العظم

0 views • 3:20 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ابدأ بزراعة الخلايا الجذعية لنخاع العظم.

أدخل المخزن المؤقت trypsin-EDTA لفصل الخلايا وكسر كتل الخلايا ، وتشكيل تعليق أحادي الخلية.

جهاز الطرد المركزي ، ثم قم بإزالة المادة الطافية. أعد تعليق الحبيبات بوسط جديد.

انقل التعليق إلى حقنة وقم بتوصيله بوحدة مرشح غشاء.

ادفع المكبس وتخلص من الوسط المحتوي على المرشح.

افصل الفلتر. املأ المحقنة بوسط جديد. قم بتوصيل الفلتر مرة أخرى ، وادفع المكبس بسرعة.

يجبر ضغط السائل الخلية على اتجاه مسام المرشح.

ينتج عن هذا حويصلة غشاء بلازما كروية أو PMV.

تحتوي هذه الحويصلات على مكونات خلوية وعضيات محاطة بالغشاء.

افحص المرشح تحت مجهر تباين الطور المقلوب لمراقبة الحويصلات الكروية الشفافة.

تتطابق أبعاد الحويصلات مع حجم مسام غشاء المرشح ، مما يؤكد توليد PMVs.

لتوليد PMVs ، أولا ، زراعة PMSCs في وسط استزراع DMEM الكامل في بئر واحد من صفيحة من ستة آبار في حاضنة رطبة عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون. عندما تصل الخلايا إلى 90٪ من التقاء ، اشطف البئر ب 0.5 مل من PBS الخالي من الكالسيوم ، وافصل الخلايا ب 0.5 مل من 0.25٪ التربسين-EDTA.

بعد ثلاث دقائق عند 37 درجة مئوية ، اضغط على الطبق براحة اليد عدة مرات لتسهيل تفكك الخلايا وإيقاف الهضم باستخدام 1 مليلتر من وسط الاستزراع. انقل الخلايا إلى أنبوب مخروطي سعة 5 ملليلتر للطرد المركزي وأعد تعليق الحبيبات في 4 ملليلتر من وسط الاستزراع الطازج. بعد ذلك ، قسم الخلايا بين بئرين من صفيحة جديدة مكونة من ستة آبار وأعد اللوحة إلى حاضنة زراعة الخلايا لمدة 24 ساعة.

في اليوم التالي ، قم بحصاد الخلايا من بئر واحد عن طريق هضم التربسين ، كما هو موضح للتو ، وإعادة تعليق الحبيبات في 0.5 مل من وسط الاستزراع الطازج بعد جمعها عن طريق الطرد المركزي. قم بتحميل الخلايا في حقنة الأنسولين سعة 1 مليلتر ، وقم بتوصيل المحقنة بوحدة مرشح. اضغط على المكبس بسرعة للضغط على الخلايا من خلال المرشح والتخلص من الوسط المبثوق. بعد ذلك ، قم بتحميل واستغناء 0.5 مل من وسط الثقافة الإضافي من خلال المرشح ، كما هو موضح للتو ، وجمع الوسيط من البثق الثاني.

ضع 150 ميكرولترا من الوسط الذي تم جمعه في طبق زجاجي سعة 35 مليلتر واترك الحويصلات تستقر لمدة 10 دقائق. بعد ذلك ، تأكد من وجود PMVs تحت مجهر تباين الطور المقلوب المجهز بكاميرا CCD باستخدام عدسة موضوعية 20 مرة.

11:11

تحديد التقسيم غشاء البلازما للبروتينات المرتبطة محيطيا

Related Videos

0 Views

09:57

عزل وتحليل الحويصلات خارج الخلية التي يمكن تتبعها والوظيفية من البلازما والأنسجة الصلبة

Related Videos

0 Views

02:57

توليد الخلايا المتغصنة المشتقة من نخاع العظام: طريقة لتوليد الخلايا المتغصنة من نخاع عظم الفأر

Related Videos

0 Views

02:18

توليد الخلايا العصبية من الخلايا الجذعية متعددة القدرات المشتقة من الدم

Related Videos

0 Views

03:58

توليد خلايا شبيهة بخلايا شوان من الخلايا اللحمية لنخاع العظام

Related Videos

0 Views

09:08

فيروسات تنبيغ من خلايا نخاع العظم السلف لتوليد خلايا T مستقبلات Retrogenic الفئران

Related Videos

0 Views

09:34

إعداد حويصلات غشاء البلازما من خلايا نخاع العظم الخلايا الجذعية الوسيطة لاحتمال استبدال السيتوبلازم العلاج

Related Videos

0 Views

09:05

توليد عدد كبير من فروعه النقوي وسلائف الخلايا الجذعية من نخاع العظام مورين باستخدام خلية رواية فرز استراتيجية

Related Videos

0 Views

11:37

بروتوكول لنقل ميكرورنا إلى المشتقة من نخاع العظام المكونة للدم الخلايا الجذعية البالغة لتمكينها هندسة الخلايا جنبا إلى جنب مع استهداف المغناطيسي

Related Videos

0 Views

08:11

الجيل الخالي من المعدلة وراثيا من الخلايا العصبية المشتقة من الدم

Related Videos

0 Views

Last updated: 18 July 2026