موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 4:21 دقيقة • July 8th, 2025
خذ ورم الورم الميلانيني في الفئران الذي يتكون من العدلات المرتبطة بالورم ، أو TANs.
تظهر TANs نشاطا مرتفعا لإنزيم نيكوتيناميد فوسفوريبوزيل ترانسفيراز ، أو NAMPT ، مما يحفز تكوين الأوعية الدموية ، وتكاثر الأوعية الدموية في الأورام ، ويسهل نمو الورم.
افرم الأنسجة وأضف الإنزيمات لتدهور مصفوفة الأنسجة ، وتخفيف الخلايا.
قم بتصفية التعليق من خلال مصفاة وجهاز طرد مركزي لتكسير الخلايا.
أضف عازلة للتحلل لتحلل خلايا الدم الحمراء ، ثم جهاز الطرد المركزي وتخلص من المادة الطافية التي تحتوي على بقايا الخلايا.
إدخال الأجسام المضادة لمنع مستقبلات Fc الخلوية ، وبالتالي تجنب التلوين المناعي غير المحدد.
أدخل كوكتيل أجسام مضادة تحمل علامة الفلوروفور مخصصا لعلامات السطح على TANs وصبغة لتمييز الخلايا الميتة.
باستخدام FACS ، قم بعزل TANs القابلة للحياة المسمى بالفلوروفور ونقلها إلى صفيحة دقيقة.
أضف مثبطا يمنع نشاط NAMPT إلى الآبار المحددة واحتضانه.
استخدم الخلايا لتقييم قدرتها على تحفيز تكوين الأوعية. تظهر TANs المعالجة بالمثبطات انخفاضا في تكوين الأوعية مقارنة ب TANs غير المعالجة.
لعزل العدلات المرتبطة بالورم ، ضع خمسة أورام لكل بئر في آبار فردية من صفيحة معقمة من ستة آبار ، حيث يتم حصادها ، واستخدم مقصا معقما لفرم الأورام إلى قطع من 2 إلى 3 ملليمترات. بعد ذلك ، قم بهضم شظايا الورم باستخدام 1 مليلتر من
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية