طريقة لمعالجة الخلايا المتغصنة بالملح العالي ونقلها بالتبني إلى الفئران

ابدأ بلوحة متعددة الآبار تحتوي على معلق من الخلايا المتغصنة أو DCs.

لتقليد حالة ارتفاع ضغط الدم ، أضف وسط استزراع يحتوي على تركيز عال من أيونات الصوديوم واحتضانه.

أثناء الحضانة ، تدخل أيونات الصوديوم إلى الخلية ، مما يزيد من تركيز الصوديوم داخل الخلايا.

يؤدي هذا إلى تبادل أيونات الصوديوم داخل الخلايا مع أيونات الكالسيوم خارج الخلية.

تعمل

زيادة مستويات الكالسيوم الداخلية على تنشيط المسارات التي تسهل توليد الألدهيدات التفاعلية ، والتي ترتبط بالبروتينات الخلوية. يؤدي هذا إلى تنشيط DCs ، التي تعرض هذه البروتينات المعدلة على سطحها.

بعد الحضانة ، اجمع الخلايا في أنبوب وجهاز طرد مركزي.

قم بإزالة المادة الطافية. أضف مخزن مؤقت جديدا لإعادة تعليق الخلايا.

ارسم معلق الخلية في حقنة.

خذ فأرا مخدرا وحقن معلق الخلية بشكل رجعي وهي منطقة خلف محجر العين.

تسمى عملية حقن الخلايا المناعية المنشطة هذه بنقل الخلايا بالتبني.

ماصة 900 ميكرولتر من نظام التعليق DC في صفيحة صقر مسطحة القاع المسطحة ذات 24 بئرا. أضف 100 ميكرولتر من وسائط ثقافة التيار المستمر عالية الملح إلى كل بئر للحصول على تركيز نهائي من الصوديوم يبلغ 190 ملليمول. قم بتسمية الطبق وضعه في حاضنة ثاني أكسيد الكربون المرطبة عند 37 درجة مئوية لمدة 48 ساعة.

بعد 48 ساعة ، أخرج اللوحة من الحاضنة. امسح وسائط زراعة الخلية في بئر واحد لأعلى ولأسفل لإعادة تعليق التيار المستمر الإيجابي ل CD11c. انقل كل التعليق إلى أنبوب 1.6 مليلتر مسمى مقابل. كرر هذا لكل بئر فردي تم طلاؤه.

جهاز الطرد المركزي جميع الأنابيب عند 300 مرة جم وعند أربع درجات مئوية لمدة 10 دقائق. قم بشفط المادة الطافية ، وأعد تعليق حبيبات التيار المستمر ب 100 ميكرولتر من DPBS المعقمة. بعد ذلك ، ارسم محلول التيار المستمر من أحد الأنابيب إلى حقنة سعة 1 مليلتر مزودة بإبرة قياس 27 نصف بوصة.

ضع الذكر الساذج ، البالغ من العمر 10 أسابيع ، C57 الفأر الأسود الستة تحت 2٪ من الأيزوفلوران لتحقيق مستوى جراحي مستقر. تحقق من مستوى التخدير مع عدم وجود منعكس الدواسة. بمجرد تحقيق مستوى جراحي مستقر ، أدخل الإبرة ببطء وحذر في الفضاء المداري الرجعي بزاوية 30 درجة تقريبا.

ببطء وسلاسة ، قم بحقن تعليق التيار المستمر الإيجابي CD11c. بمجرد اكتمال الحقن ، قم بإزالة الإبرة بعناية للمساحة المدارية الرجعية ، مع التأكد من عدم إتلاف العين. ثم قم بإزالة الفئران من مخروط الأنف ، وراقبها لمدة 30 دقيقة تقريبا أثناء التعافي من التخدير.