JoVE Encyclopedia of Experiments
علم المناعة
0 مشاهدات • 4:16 د • July 8th, 2025
ابدأ بفأر NOD مقيد يعاني من نقص المناعة يفتقر إلى الخلايا المناعية وعرضة لمرض السكري.
يتم حقن هذا الفأر مسبقا بخلايا بيتا البنكرياس المعدلة وراثيا التي تنتج الأنسولين وتعبر عن إنزيمات لوسيفيراز.
خذ حقنة تحتوي على خلايا الطحال المعالجة مسبقا والمشتقة من فأر السكري. تشتمل خلايا الطحال على خلايا تائية ذاتية التفاعل مع القدرة على التعرف على ببتيدات الأنسولين.
قم بإدارة هذه الطحال في وريد ذيل الفأر.
تنتشر خلايا الطحال وتصل إلى البنكرياس ، حيث تتعرف الخلايا التائية ذاتية التفاعل على ببتيدات الأنسولين الموجودة على خلايا بيتا وتصبح نشطة.
تطلق هذه الخلايا المنشطة جزيئات سامة للخلايا ، مما يؤدي إلى تدمير خلايا بيتا عن طريق التفاعل الذاتي.
بعد ذلك ، قم بحقن ركيزة لوسيفيراز في الصفاق من الفأر. تنتشر الركيزة في هذه المنطقة وتدخل خلايا بيتا.
داخل الخلايا ، تتفاعل الركيزة مع إنزيمات لوسيفيراز ، مما ينتج عنه لمعان.
باستخدام نظام التصوير الحيوي ، التقط الصور على فترات منتظمة
يشير الانخفاض التدريجي في اللمعان إلى تدمير خلايا بيتا المعدلة وراثيا بسبب التفاعل الذاتي.
قم بتسخين جسم المتلقي البالغ ، الفئران NOD-scid باستخدام مصباح حراري لمدة 5 إلى 10 دقائق لتوسيع الأوردة. أعد تعليق محلول خلايا الطحال قبل كل حقنة. لكل فأر ، اسحب 100 ميكرولتر من تعليق خلايا الطحال الدافئة مسبقا في المحقنة. تأكد من عدم وجود فقاعات هواء.
بعد ذلك ، ضع الماوس في جهاز التقييد قبل التقاط ذيله باليد غير المهيمنة. حدد موقع أحد وريد الذيل الجانبي. قم بتدوير الذيل برفق إذا لزم الأمر. امسح الذيل بمنديل تطهير يحتوي على 70٪ كحول الأيزوبروبيل.
باستخدام اليد المهيمنة ، أدخل الإبرة بزاوية حادة في المنطقة الوسطى من الذيل. مع توجيه شطبة الإبرة لأعلى ، حرك الإبرة بضعة ملليمترات عبر الجلد. بعد ذلك ، قم بالضغط برفق على المحقنة لحقن تعليق خلايا الطحال. لا تسمح للإبرة بالتحرك أكثر للداخل أو الخارج عند الحقن. لا تؤدي الحقن الناجحة إلى الضغط الخلفي أثناء الحقن ، ويشار إليها بتدفق الدم الشفاف أو الأبيض مباشرة بعد الحقن.
بعد الحقن ، حرر الإبرة برفق من الوريد واضغط خفيفا على الذيل بمسح تطهير حتى يتوقف النزيف. حرر الماوس من جهاز التقييد وانقله برفق إلى قفص معد حديثا. قبل 5 دقائق على الأقل من التصوير ، قم بحقن الفأر داخل الصفاق بالجرعة المناسبة من محلول D-luciferin ، باستخدام حقنة سعة 1 مليلتر وإبرة قياس 26.
بعد تسجيل الدخول إلى برنامج التصوير، في لوحة التحكم، حدد تهيئة. لحفظ بيانات التصوير تلقائيا ، انقر فوق اكتساب متبوعا بالحفظ التلقائي في ، وقم بإنشاء المجلدات المناسبة في الكمبيوتر. بمجرد انتهاء تهيئة الجهاز، اضبط وقت التعرض على دقيقة واحدة.
ضع الماوس على أداة التصوير في وضع الانبطاح مع أطرافه المفلطحة ووجه رأسه إلى مخروط الأنف. قم بتسطيح الماوس برفق بالضغط على منتصف ظهره بكلتا يديه ، ثم افرد اليدين للخارج ومتباعدتين. ثم في برنامج التصوير، حدد اكتساب، وسجل أي تفاصيل ذات صلة بالتجربة.