توليد أسلاف عصبية من الخلايا الجذعية الجنينية في مزارع أحادية الطبقة خالية من المصل

ابدأ بزراعة الخلايا الجذعية الجنينية للفأر.

اغسل الخلايا بمخزن مؤقت لإزالة الوسائط وحطام الخلايا.

أضف كوكتيل إنزيم لفصل الخلايا عن سطح القارورة.

أضف وسائط لإيقاف النشاط الأنزيمي وجمع الخلايا في أنبوب. جهاز الطرد المركزي والتخلص من المادة الطافية المحتوية على الإنزيمات.

أعد تعليق الخلايا في وسط زراعة الخلايا العصبية الخالية من المصل.

بذر الخلايا في آبار ألواح متعددة الآبار المطلية بالجيلاتين.

حضن. تلتصق الخلايا الجذعية الجنينية بالسطح المغطى بالجيلاتين. تسهل مكونات الوسائط ، بما في ذلك العناصر الغذائية وعوامل النمو والهرمونات ، تكاثر الخلايا وتشكل طبقة أحادية.

عند كثافة الخلايا هذه ، تنتج الخلايا الجذعية الجنينية وتطلق المستويات المثلى من عوامل النمو والسيتوكينات.

تؤدي

هذه الجزيئات إلى مسارات إشارات داخل الخلايا ، مما يسهل تمايز الخلايا الجذعية الجنينية إلى أسلاف عصبية.

امزج الجيلاتين مع 500 مل من PBS الدافئ وقم بتغطية قاع حاوية زراعة الخلايا بما يكفي من المحلول لتغطية السطح. أثناء طلاء الجيلاتين ، اشطف المزرعة الفرعية للخلايا الجذعية الجنينية للفأر مرتين في PBS. ثم أضف 1 ملليلتر من كاشف التفكك إلى الثقافة.

بعد دقيقتين إلى خمس دقائق ، اضغط على الوعاء لإخراج الطبقة الأحادية إلى معلق أحادي الخلية وجمع الثقافة في ما مجموعه 10 ملليلتر من كاشف تفكك الخلية والمتوسطة.

انقل الخلايا إلى أنبو