توليد وتمايز المجالات العصبية الأولية من الخلايا الجذعية العصبية لأسماك الزرد

ابدأ بلوحة متعددة الآبار تحتوي على وسط نمو غني بعوامل النمو.

بذرة معلق أحادي الخلية من الخلايا الجذعية العصبية لأسماك الزرد واحتضنها.

في البداية ، تستخدم الخلايا الجذعية عوامل النمو وتتكاثر.

قم بإزالة الحطام وإضافة الوسط الطازج لتعزيز التكاثر المستمر للخلايا والتراكم التلقائي لتشكيل مجالات عصبية أولية عائمة بحرية.

بعد ذلك ، انقل المجالات العصبية إلى بئر جديد يحتوي على وسط النمو.

احتضان في ظل نفس الظروف للحث على التوسع التدريجي للمجالات العصبية.

الماصة مرارا وتكرارا لفصل المجالات العصبية ميكانيكيا إلى مجموعات صغيرة.

بعد ذلك ، انقلها إلى مصفوفة خارج الخلية مطلية جيدا ، مما يسهل التصاقها.

استبدل وسط النمو بوسط تمايز خال من عامل النمو يحتوي على الأنسولين.

يؤدي غياب عوامل النمو ووجود الأنسولين إلى تحفيز تمايز الخلايا إلى خلايا دبقية وخلايا عصبية ذات إسقاطات عصبية.

للتحضير لتوليد الغلاف العصبي ، املأ كل بئر من صفيحة 24 بئرا ب 300 ميكرولتر من وسط Z الطازج. ثم أضف 200 ميكرولتر من تعليق الخلية إلى كل بئر ، وقم بزرعها بكثافة حوالي 500 خلية لكل ميكرولتر. بعد ذلك ، احتضان اللوحة عند 30 درجة مئوية في 5٪ ثاني أكسيد الكربون.

بعد يوم واحد من الثقافة ، شاهد الخلايا في الصفيحة المكونة من 24 بئرا تحت المجهر. توقع ملاحظة معلقات خلية واحدة في هذه المرحلة. إذا شوهد أن أي حطام قد تجمع في وسط البئر ، فقم