إزالة الخلايا الدبقية الصغيرة بشكل انتقائي من ثقافة الخلايا العصبية الحبيبية المخيخية للفئران

خذ مخيخ الفئران المحصود وقطعه إلى شظايا.

انقل الشظايا إلى أنبوب يحتوي على التربسين واحتضنها.

يهضم التربسين المصفوفة خارج الخلية للأنسجة ، مما يؤدي إلى فك الخلايا العصبية الحبيبية المخيخية ، وكذلك الخلايا غير العصبية مثل الخلايا الدبقية الصغيرة والخلايا النجمية.

أضف مخزن مؤقت يحتوي على مثبط التربسين و DNase. يقوم المثبط بتعطيل التربسين بينما يحلل DNase الحمض النووي الملوث.

جهاز الطرد المركزي والتخلص من المادة الطافية.

أعد تعليق الأنسجة في مخزن مؤقت يحتوي على المثبط و DNase ، وفصله ميكانيكيا لتشكيل معلق أحادي الخلية.

تراكب المعلق على محلول عازل يحتوي على البروتين.

جهاز الطرد المركزي والتخلص من المادة الطافية التي تحتوي على الحطام الخلوي.

أعد تعليق الخلايا في الوسائط وبذرها على أغطية مطلية ببولي إل ليسين لتسهيل الارتباط الخلوي.

قم بإزالة الوسائط. اغسل الخلايا بوسائط جديدة ، ثم أضف وسائط تحتوي على مثبط دورة الخلية لمنع تكاثر الخلايا الدبقية.

استبدل نصف الوسائط بوسائط جديدة تحتوي على مثبط لليزوزوم.

يستهدف المثبط بشكل انتقائي الخلايا الدبقية الصغيرة ويعطل الأغشية الليزوزومية ، مما يتسبب في موت الخلايا الدبقية الصغيرة وإزالتها من المزرعة.

ابدأ هذا الإجراء عن طريق جمع المخيخ من صغار الفئران البالغة من العمر أربعة إلى سبعة أيام. ضعها على الفور في طبق بتري يحتوي على خمسة ملليلتر من المحلول أ