موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 2:26 دقيقة • July 8th, 2025
خذ الخلايا العصبية التي يسببها الإنسان ، أو iNs ، المزروعة على مصفوفة خارج الخلية.
قم بإزالة الوسائط وإضافة الإنزيمات الهاضمة التي تعطل المصفوفة ، وتفصل الخلايا.
انقل iNs إلى أنبوب. الطرد المركزي للتعليق والتخلص من المادة الطافية التي تحتوي على الإنزيمات.
أعد تعليق iNs في وسط زراعة مشتركة ؛ انقلها إلى مزرعة الخلايا السليفة قليلة التغصن المستحثة ، أو iOPCs.
iOPCs هي سلائف لخلايا الدبقية قليلة التغصن التي تشكل أغلفة المايلين حول محاور الخلايا العصبية.
عند الحضانة ، تشكل iOPCs اتصالات متشابكة مع iNs. العوامل الغذائية التي تطلقها iOPCs وعوامل النمو في الوسط تعزز نضوج iN في الخلايا العصبية ، مما يدل على زيادة العمليات الخلوية التي تشكل اتصالات متشابكة مع الخلايا العصبية الأخرى.
يؤدي النشاط الكهربائي للخلايا العصبية الناضجة وعوامل النمو في الوسط إلى نضوج iOPC إلى الخلايا قليلة التغصن.
تعملالخلايا قليلة التغصن على تمديد العمليات الخلوية ، وتشكل أغلفة المايلين حول المحاور العصبية.
الثقافة المشتركة الراسخة جاهزة للتحليل.
في اليوم 14 ، لوحة iOPCs بكثافة 1 × 105 خلايا لكل بئر في صفيحة 24 بئر في وسط تمايز OPC. في اليوم التالي ، افصل الخلايا العصبية البشرية المستحثة بمحلول انفصال الخلية. أضف الخلايا العصبية إلى OPCs المستنبتة ، مع الطلاء بكثافة جلوس تبلغ 2 × 105 خلايا لكل بئر. استخدام وسط الزراعة المشتركة التي تحتوي على عصبي القاعدي A-متوسط, 2٪ B-27 الملحق, و 100 نانوغرام لكل مليلتر T3 ثلاثي يودوثيرونين. قم بتغيير الوسيط في اليوم التالي ، ثم كل يومين. إذا تكاثرت OPCs بسرعة كبيرة ووصلت إلى التقاء في أقل من ثلاثة أيام ، أضف 2 إلى 5 ميكرومولار Ara-C.