عزل الخلايا واستزراعها من الورم الدبقي البنطي الجوهري المنتشر

ابدأ بشظايا أنسجة جذع الدماغ التي تحتوي على الورم الدبقي الجسري الجوهري المنتشر ، وهو ورم مشتق من الخلايا السلفية الدبقية في بيئة غنية بالأعصاب النخاعي.

عالج بالإنزيمات المحللة للبروتين لتحلل المصفوفة خارج الخلية للنسجة.

بعد الحضانة ، قم بعمل ماصة المحتويات بشكل متكرر لتسهيل تفكك الخلايا وتدهور غمد المايلين.

تصفية وأجهزة الطرد المركزي لجمع الخلايا. قم بإزالة المادة الطافية وأعد تعليقها في عازلة باردة.

أضف محلول السكروز لفصل تدرج الكثافة واخلطه جيدا.

بعد ذلك ، جهاز الطرد المركزي لفصل الخلايا الأثقل عن حطام المايلين الأخف.

قم بإزالة طبقة المايلين وأضف المخزن المؤقت لتحلل كرات الدم الحمراء.

أضف عازلة باردة لإيقاف عمل التحلل. جهاز الطرد المركزي وإزالة المادة الطافية للتخلص من كرات الدم الحمراء المحللة.

أعد تعليق الخلايا في وسط عصبي قاعدي دافئ وزرعها في قارورة غير مغلفة.

يؤدي عدم وجود عوامل عصبية إلى موت الخلايا العصبية ، بينما تستخدم الخلايا السلفية الدبقية العناصر الغذائية وعوامل النمو ، مما يؤدي إلى الانتشار. أضف وسيطا جديدا للحفاظ على مستويات عامل النمو.

بمرور الوقت ، تتجمع هذه الخلايا تلقائيا في مجموعات الخلايا ، وتشكل مجالات عصبية عائمة بحرية.

في هذا الإجراء ، قم بالطرد المركزي للأنبوب المخروطي الذي يحتوي على شظايا الأنسجة المتبقية لمدة خمس دقائق. بعد ذلك ، قم بإزالة المادة الطافي