موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 2:08 دقيقة • July 8th, 2025
في صفيحة الثقافة ، قم بتغطية الغطاء بالبولي أورنيثين ، وهو بوليمر موجب الشحنة ، واحتضانه.
يشكل البولي أورنيثين طبقة تشبه الشبكة تساعد الخلايا سالبة الشحنة على الالتصاق بالغطاء.
قم بإزالة المحلول واغسل الغطاء بمحلول ملح مخزن لإزالة البوليورنيثين غير المرتبط.
أضف محلولا يحتوي على بروتين مصفوفة خارج الخلية يسمى laminin واحتضانه.
يشكل Laminin مصفوفة فوق الغطاء المطلي بالبولي أورنيثين ، مما يعزز ارتباط الخلية.
تخلص من المحلول وخذ عددا صغيرا من الخلايا الجذعية العصبية المعلقة في وسط خال من عامل النمو.
أضف هذه المزرعة منخفضة الكثافة فوق الغطاء المحضر في حركة دوارة بطيئة لتوزيع الخلايا بالتساوي.
في البداية ، يعزز الحرمان من عامل النمو انقسام الخلايا.
بمرور الوقت ، تتمايز الخلايا الجذعية إلى خلايا عصبية ذات نتوءات طويلة
في النهاية ، تنتج الخلايا العصبية هياكل شبيهة بالعمود الفقري فوق إسقاطاتها ، مثل الخلايا العصبية الهرمية القشرية.
لتحضير الثقافات العصبية ، ضع أغطية زجاجية في أطباق مزرعة مكونة من ستة آبار ، وأضف البولي أورنيثين. احتضن طوال الليل تحت غطاء التدفق. في اليوم التالي ، استخدم DPBS لغسل أغطية الغطاء ثلاث مرات وإضافة اللامينين. احتضن تحت غطاء التدفق لمدة 10 ساعات على الأقل.
تحضير وسط الاستزراع الذي يحتوي على المكونات التالية. بعد ذلك ، استخدم الخلايا الجذعية العصبية أو الخلايا الجذعية العصبية بكثافة 50,000 خلية لكل سنتيمتر مربع ، مع سحب العينات بحركات دوارة بطيئة من أجل تقليل تجمع الخلايا.