إنشاء مزرعة الخلايا الدبقية في مولر التي تم الحصول عليها من شبكية العين الفئرانية

خذ شبكية العين الفأرية التي تحتوي على خلايا Müller Glaal أو MG والخلايا العصبية.

ضعها في محلول تفكك مع إنزيمات الجهاز الهضمي واحتضانها بهزاز لطيف لضمان توزيع الإنزيم بشكل متساو.

تعمل هذه الإنزيمات على تكسير المصفوفة خارج الخلية ، وفصل الخلايا الفردية.

ماصة شبكية العين لأعلى ولأسفل عدة مرات لتحرير الخلايا.

أضف مثبطا لوقف نشاط الإنزيم ، ثم جهاز الطرد المركزي.

تخلص من المادة الطافية.

أعد تعليق الخلايا في الوسائط التي تحتوي على عامل نمو خاص بخلايا MG.

نقل الخلايا إلى بئر واحتضانها.

بمرور الوقت ، يسهل عامل النمو في الوسائط نمو وتكاثر خلايا MG بينما تموت الخلايا العصبية غير المنقسمة.

قم بإزالة الوسائط. يغسل بمحلول ملح.

احتضان مع إنزيم هضمي لفصل الخلايا عن البئر.

اجمع الخلايا في أنبوب ثم جهاز الطرد المركزي.

تخلص من المادة الطافية التي تحتوي على الخلايا العصبية الميتة.

أعد تعليق خلايا MG في الوسائط لمزيد من التحليل.

تحضير خليط تفكك غراء DNase I كما هو موضح في المخطوطة. الآن ، باستخدام ماصة نقل ذات رأس متضخمة ، التقط شبكية العين. انتظر حتى تستقر شبكية العين في الجزء السفلي من الطرف ، وحرر شبكية العين ، دون HBSS مفرط ، في الأنبوب الذي يحتوي على خليط غراء DNase I.

بعد ذلك ، ضع الأنبوب على مغذي في الحاضنة واحتضنه لمدة 10 دقائق عند 37 درجة مئوية وبثاني أكسيد الكربون بنسبة 5٪. بعد ذلك ، قم بفصل