عزل الخلايا العقدية الشبكية الفئرانية باستخدام فرز الخلايا المنشط بالفلورة
موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 3:10 دقيقة • July 8th, 2025
ضع شبكية الفئران على مصفاة خلوية مبللة وانقع في حركة دائرية لفصل خلايا الشبكية عن المصفوفة خارج الخلية.
انقل المصفاة إلى أنبوب التجميع.
أضف محلول الفوسفات ومحلول المصل إلى المصفاة لغسل الخلايا وجمعها.
جهاز طرد مركزي لتسوية الخلايا. تخلص من المادة الطافية وأعد تعليق الخلايا في محلول الفوسفات والمصل.
أضف الأجسام المضادة الحاجزة التي ترتبط بمستقبلات Fc على الخلايا ، مما يمنع الارتباط غير المحدد للأجسام المضادة المستهدفة.
بعد ذلك ، أضف الأجسام المضادة الأولية ذات العلامات الفلورية وغير الموسومة التي ترتبط بعلامات سطح خلية معينة على أنواع مختلفة من الخلايا.
يغسل لإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة.
أضف جسما مضادا ثانويا يحمل علامات الفلورسنت للارتباط بالجسم المضاد الأولي غير المميز.
يغسل لإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة.
قم بإجراء فرز الخلايا المنشطة بالفلورة ، أو FACS لالتقاط إشارات الفلورسنت المميزة للخلايا المسماة وفرز الخلايا العقدية الشبكية من مجموعات مختلفة من خلايا الشبكية.
ضع ما يصل إلى 12 شبكية العين على مصفاة نايلون معقمة سعة 70 ميكرون مبللة ب PBS و FBS ، ونقع شبكية العين برفق بالطرف الخلفي لمكبس حقنة سعة 10 مليلتر باستخدام حركة دائرية. عندما يتم فصل جميع الخلايا ، ضع المصفاة فوق أنبوب تجميع البولي بروبلين ، واستخدم ماصة P1000 لتصفية الخلايا من خلال المصفاة في أنبوب التجميع
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية