عزل وثقافة الخلايا العصبية الدوبامين في منتصف الدماغ الجنيني الأولي

خذ أنسجة أرضية الدماغ الأوسط المعزولة من المنطقة البطنية من الدماغ الأوسط لأجنة الفئران.

الأنسجة غنية بالخلايا العصبية الدوبامين النامية ، والتي تطلق الناقل العصبي الدوبامين.

أضف محلول إنزيم لتحطيم مصفوفة الأنسجة ، وبالتالي تخفيف الخلايا.

أضف محلول مصل يحتوي على DNase I وقم بفصل الأنسجة المهضومة ميكانيكيا لتوليد تعليق الخلية. تمنع بروتينات المصل الإنزيمات ، بينما يحلل DNase I الحمض النووي خارج الخلية المنبعث أثناء تحلل الخلايا ، مما يمنع تكتل الخلايا.

دع بقايا الأنسجة تستقر وتنقل الخلايا العالقة إلى أنبوب جديد.

جهاز الطرد المركزي وإزالة المادة الطافية ، ثم إعادة تعليق الخلايا في وسط الخلايا العصبية الدوبامين ، أو DPM.

خذ صفيحة دقيقة مطلية بركيزة زراعة الخلايا في وسط الآبار ، مما يؤدي إلى إنشاء جزر صغيرة.

انقل الخلايا إلى منتصف الجزر الصغيرة لزراعتها بكثافة عالية.

احتضان ، مما يسمح للخلايا بالالتصاق بالجزر الصغيرة.

املأ الآبار ب DPM واحتضانها ، مما يسهل نمو الخلايا العصبية الدوبامينية.

لإعداد مزارع الدماغ المتوسط الجنينية الأولية من أجنة الفئران الجنينية 13.5 ، قم بتجميع جميع أرضيات منتصف الدماغ التي تم حصادها في نفس الأنبوب سعة 1.5 مليلتر ، واغسل العينات ثلاث مرات ، مع 500 ميكرولتر من HBSS الخالي من الكالسيوم والمغنيسيوم لكل غسلة. بعد الغسيل الأخير ، استبدل HBSS ب 0.5٪ تريبسين لمدة