تمييز الخلايا الجذعية متعددة القدرات المستحثة البشرية إلى خلايا عصبية حركية وظيفية

خذ الخلايا الجذعية متعددة القدرات المستحثة البشرية ، أو iPSC ، مستعمرات مستزرعة على صفيحة مغلفة بالمصفوفة خارج الخلية.

يتم تعديل iPSCs وراثيا للتعبير عن عوامل النسخ التي تحفز تمايز الخلايا العصبية الحركية.

قم بإزالة الوسائط وإضافة الإنزيمات لفصل المستعمرات.

قم بفصل الخلايا ميكانيكيا في معلق أحادي الخلية وجمعها.

جهاز الطرد المركزي وإزالة المادة الطافية.

أعد تعليق الخلايا في الوسائط التي تحتوي على مثبط يمنع موت الخلايا المبرمج الخلوي.

ضع الخلايا في طبق مغطى بالمصفوفة.

أضف وسائط تمايز جديدة تحتوي على المضاد الحيوي دوكسيسيكلين ومثبطات الجزيئات الصغيرة.

الدوكسيسيكلين يحفز التعبير عن عامل النسخ, في حين أن المثبطات منع مسارات إشارات محددة, تعزيز تمايز iPSC إلى أسلاف الخلايا العصبية الحركية.

أضف الإنزيمات لفصل الخلايا.

اجمع الخلايا وفصلها ميكانيكيا.

جهاز الطرد المركزي والتخلص من المادة الطافية. أعد تعليق الخلايا في الوسط العصبي.

ضع الخلايا على شرائح دقيقة مطلية بالبروتين اللاصق لتعزيز التصاق الخلايا.

تحفز عوامل النمو في الوسائط نضوج السلف في الخلايا العصبية الحركية.

لتمايز الخلايا العصبية الحركية ، قم بفصل مزارع الخلايا المنقولة بثبات مع كاشف التفكك كما هو موضح للسماح بجمع الخلايا في أنبوب سعة 15 مليلتر يحتوي على 5 أحجام من وسط DMEM / F12. بعد الطرد المركزي ، قم بإعادة تعليق الخلايا في وسط